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《褪黑素對ptz致癇大鼠海馬神經(jīng)元凋亡的影響論文》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、褪黑素對PTZ致癇大鼠海馬神經(jīng)元凋亡的影響論文.freelg/kg)，誘導癲癇發(fā)作，NC組腹腔注射等量生理鹽水。MT組按體重10mg/kg于注射PTZ之前20min、立即、后1h、后2h分別經(jīng)腹腔注射MT并觀察1h，PTZ組于相同時間注射生理鹽水。然后處死大鼠取腦，應用免疫組織化學的方法檢測海馬神經(jīng)元Bax和Bcl-2蛋白的表達。結果大鼠海馬神經(jīng)元Bax的改變：PTZ組明顯高于NC組，MT組明顯低于PTZ組，但高于NC組：大鼠海馬神經(jīng)元Bcl-2的改變：PTZ組明顯高于NC組，MT組明顯高于PTZ組.freelelatoninonb
2、cl-2andbaxofhippocampusinseizuresratsinducedbyPTZ.MethodsTlydividedintothreegroups，NCgroup，PTZgroupandMTgroup.AdoseofPTZ(60mg/kg)inisterededoseofnormalsaline.TheratsofMTgroupinisteredintraperitoneallyg/kg)in20minutebeforeinjectingPTZ，atonetime，1and2hourafterinjection.S
3、imultaneouslythesamedoseofnoramlsalineinisteredintraperitoneallyonPTZgroup.Theratsmunoreactivityofneruononhippocampusbyusingimmunohistochemistrymethod.ResultsThenumberandopticaldensityofBaxinhippocampusofPTZgroupratsberandopticaldensityofBaxinhippocampusofMTgroupratsbe
4、randopticaldensityofBcl-2inhippocampusofPTZgorupratsberandopticaldensityofBcl-2inhippocampusofMTgroupratspusneruonbyincreasedtheexpressionofBcl-2anddecreasedtheexpressionofBax.【Keyelatonin；seizure；pentyleetrazole；bax；bcl-2難治性癲癇是神經(jīng)系統(tǒng)的常見病，發(fā)病機制至今沒有完全闡明，癲癇長期發(fā)作可能造成患者的智力和認知發(fā)
5、生改變，給社會和家庭帶來沉重的負擔。大量動物實驗發(fā)現(xiàn)癲癇發(fā)作后中樞神經(jīng)系統(tǒng)存在細胞凋亡，臨床癲癇病人也大多有海馬硬化存在。褪黑素(Melatonin，MT)是松果體分泌的神經(jīng)內分泌激素，它對人體的作用非常廣泛，近年研究發(fā)現(xiàn)它具有抗癲癇發(fā)作的報道［1］，但是它是否對癲癇發(fā)作后神經(jīng)細胞的凋亡具有保護作用研究較少，本實驗旨在通過觀察MT對戊四氮(pentyleetrazole，PTZ)點燃大鼠海馬神經(jīng)元的Bcl-2和Bax的影響，借以了解其對神經(jīng)元細胞凋亡的保護作用，弄清它在治療癲癇中的進一步作用機制。1材料與方法1.1材料戊四氮及多聚甲
6、醛均為Sigma公司產品，兔抗Bcl-2和Bax抗體購自北京中山試劑有限公司，T的制備MT臨用前用無水乙醇溶解，再加生理鹽水配制，使乙醇的濃度為5%。1.3動物飼養(yǎng)與分組提前1g/kg)誘導癲癇發(fā)作，并觀察行為學變化。MT組按體重10mg/kg于注射PTZ之前20min、注射后立即、后1h、后2h分別經(jīng)腹腔注射MT并觀察1h，PTZ組于相同時間注射等量含5%乙醇生理鹽水。然后，3組全部行心臟灌注固定取材。1.4灌注與取材動物先用10%的水合氯醛(0.3g/kg)腹腔注射麻醉，麻醉顯效后開胸在直視下將穿刺針自左心室插入主動脈，自右心房
7、剪口放血，先快速注入約150ml生理鹽水，然后滴注4%的多聚甲醛500ml，先快后慢，持續(xù)約1h，然后斷頭取腦，取出腦組織后修塊(含海馬)，將組織塊放入4%多聚甲醛中，2～4h后取出，放入20%的蔗糖中過夜，常規(guī)脫水、透明、浸蠟、包埋、切片，片厚4μm。1.5免疫組織化學方法(S-P法)每只動物取8張腦片，4張用于Bax，4張用于Bcl-2。具體步驟如下：(1)切片常規(guī)脫臘入水，PBS(pH7.4)洗3次，每次3min。(2)高壓修復抗原，將切片浸入0.01M的枸櫞酸緩沖(pH6.0)，高壓加熱，噴氣后2min。(3)每張切片滴加1
8、滴過氧化酶阻斷溶液，37℃孵育10min，以阻斷內源性過氧化酶的活性。PBS洗3次，每次3min。(4)每張切片滴加1滴正常山羊血清封閉液，室溫孵育15min。(5)每張切片滴加1滴兔抗Bax和Bcl-2抗體，4℃過夜。(6)PBS洗
