親和層析的應(yīng)用

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1、親和層析的應(yīng)用親和層析親和層析（affinitychromatography）是利用待分離物質(zhì)和它的特異性配體間具有特異的親和力，從而達(dá)到分離目的的一類特殊層析技術(shù)。親和層析法具有多方面的應(yīng)用。核酸的純化因?yàn)镈NA與RNA之間具有專一性的親和力，所以親和層析可應(yīng)用于核酸的研究，例如從大腸桿菌的RNA混合物中分離出專一于噬菌體T4的RNA，可將T4的DNA以共價(jià)鍵結(jié)方式接于cellulose材質(zhì)的管柱中，再將所要的RNA分離出。此外，根據(jù)核酸與蛋白質(zhì)之間交互作用的原理，可以將單股DNA接在Sepharose上，純化DNA聚合酶或RNA聚合酶。激素受體的純化激素受體是細(xì)胞膜上與

2、特定激素結(jié)合的成份，激素和受體的作用具有特異性，目前用親和層析法已經(jīng)能夠?qū)⒓に嘏csephrose的組合，純化胰島素、正甲狀腺素的受體?？贵w與抗原的純化抗體與抗原結(jié)合具有高度專一性，Sepharose是這一類親和層析較佳的載體，由于抗原-抗體復(fù)合物的解離常數(shù)很低，因此抗原在固定化抗體上被吸附后，要盡快將它洗出，沖洗液的條件通常是控制pH值至3以下，成份為醋酸、鹽酸、Tris-HCl緩沖液、20%甲酸或1mol/L丙酸，也有使用尿素這一類的蛋白質(zhì)變性劑作為洗出用的溶液。酶和酶的抑制劑純化使用親和層析法純化酶，可以得到相當(dāng)好的效果。例如，要分離豬和牛的胰蛋白酶，可以連接雞卵黏蛋白

3、（胰蛋白酶的抑制劑）與Sepharose4B當(dāng)作層析柱材質(zhì)，用它純化出來(lái)的胰蛋白酶相當(dāng)于5次再結(jié)晶的純度。除了使用抑制劑當(dāng)配體，也可以反過(guò)來(lái)用酶作為配體來(lái)純化抑制劑，例如，將胰蛋白酶接到Sepharose上，能有效分離純化大腸桿菌中的胰蛋白抑制劑Ecotin。Chitin幾丁質(zhì)CHOM雞蛋粘多糖蛋白Trypsin胰島素親和層析的應(yīng)用親和層析法分離膽固醇氧化酶季文明,陳毅力等江南大學(xué)生物工程學(xué)院親和層析法分離膽固醇氧化酶膽固醇氧化酶是一種多功能酶。目前,醫(yī)院應(yīng)用膽固醇氧化酶檢測(cè)血清膽固醇含量。膽固醇氧化酶可以降低食品中的膽固醇含量；能有效抑制鱗翅目昆蟲(chóng)的生長(zhǎng)繁殖,是一種生物殺

4、蟲(chóng)劑；膽固醇的氧化產(chǎn)物膽甾-4-烯-3-酮還具有抗肥胖、治療肝病等藥效。親和層析法分離膽固醇氧化酶發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)過(guò)鹽析操作以后，得到層析用樣品。他們利用一種脂溶性凝膠SepherdexLH20作為膽固醇的載體,其分離的分子量小于3000。膽固醇也為脂溶性的化合物,與凝膠LH20有很好的相容性,而酶蛋白不能進(jìn)入凝膠。親和層析法分離膽固醇氧化酶他們每次進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)加入1~5ml的樣品,用1~5倍體積的緩沖液A洗去雜物,流速為0.5~2ml/min；然后再用緩沖液B洗脫酶蛋白,流速為015~2ml/min。親和層析法分離膽固醇氧化酶他們對(duì)表面活性劑的濃度和洗脫速度的條件進(jìn)行了考察，得到

5、用親和層析分離純化膽固醇氧化酶,酶比活從0.45U/mg提高到15.5U/mg。親和層析的適合條件為洗脫液A的流速是015ml/min,洗脫液B的流速是210ml/min。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)可用此法分離純化膽固醇氧化酶,但是從實(shí)際操作和經(jīng)濟(jì)角度考慮，該法不適合大規(guī)模處理。謝謝大家！