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《eb病毒相關(guān)胃癌組織中vegf表達(dá)的研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、EB病毒相關(guān)胃癌組織中VEGF表達(dá)的研宄孫萍1(通訊作者)羅兵2周冬梅3(1煙臺毓璜頂醫(yī)院山東煙臺264000)(2青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院微生物教研室山東青島266003)(3煙臺市煙臺山醫(yī)院山東煙臺264001)【摘要】目的:檢測EBV相關(guān)胃癌(EBVassociatedgastriccarcinomas,EBVaGC)和與之匹配的EBV陰性胃癌(EBVnetativegastriccarcinomas,EBVnGC)VEGF的表達(dá)，同時檢測EBV相關(guān)基因的表達(dá)，探討它們在EBVaGCs發(fā)生發(fā)展中的作用。方法：選取13例EBVaGCs、4
2、5例與之相兀配的EBVnGCs和58例相應(yīng)癌旁組織作為研宄對象，采用免疫組化技術(shù)檢測VEGF蛋白的表達(dá)；RT-PCR和Southern雜交技術(shù)檢測EBV相關(guān)基因(核抗原EBNA1和EBNA2編碼基因，潛伏膜蛋白LMP1編碼基因，早期基因BARF1和BHRF1)的表達(dá)。結(jié)果：①癌組織VEGF陽性率為72.41%(42/58),明顯低于相應(yīng)癌旁組織87.93%(51/58)(P=0.022)；EBVaGC組織中VEGF陽性表達(dá)率為84.61%(11/13),明顯高于EBVnGC組織68.9%(31/45),兩組間差別有統(tǒng)計學(xué)意義(&ch
3、i;2=3.928,P=0.047｝②13例EBVaGCsEBNA1mRNA均為陽性，而EBNA2和LMP1mRNA均為陰性；早期基因中有6例BARF1表達(dá)陽性，2例BHRF1表達(dá)陽性。結(jié)論:①EBVaGC及EBVnGC中高表達(dá)VEGF，但是EBVaGC中VEGF的表達(dá)與血管牛.成和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切程度不如EBVnGC②EBVaGC組織中LMP1和EBNA2表達(dá)陰性，與c-myc的表達(dá)和細(xì)胞增殖無明顯相關(guān)性，早期基因BARF1和BHRF1可通過轉(zhuǎn)化細(xì)胞等作用促進(jìn)腫瘤的發(fā)牛.發(fā)展。【關(guān)鍵詞】胃癌EB病毒VEGFRT-PCR【中圖分類
4、號】R730.2【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】2095-1752(2012)20-0128-03EB病毒(Epstein-BarrVirus,EBV)是重要的致瘤病毒，以往的研宄多集中在EBV與Burkitt淋巴瘤、鼻咽癌、何杰金病和免疫缺陷病人的B淋巴細(xì)胞瘤等的關(guān)系，近年來研宄發(fā)現(xiàn)約7?16%的胃癌組織EBV陽性，EBV感染在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用也愈來愈受到重視。本研宄采用免疫組化方法檢測13例EBVaGCs、45例與之相匹配的EBVaGCs以及相應(yīng)癌旁組織中VEGF的表達(dá)，RT-PCR檢測EBV相關(guān)胃癌組織中病毒潛伏期基因EBNA
5、1、EBNA2、LMP1以及早期基因BARF1和BHRF1的表達(dá)，以探討EBVaGC中EBV相關(guān)基因與PCNA和c-myc基因表達(dá)的關(guān)系及在胃癌發(fā)生發(fā)展的作用。1材料和方法1.1研究對象：隨機(jī)選取青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院、青島市立醫(yī)院及煙臺毓璜頂醫(yī)院2008年1月?2009年12月間185例胃癌患者手術(shù)切除的新鮮胃癌組織和相應(yīng)癌旁組織（距離癌組織5cm以上）制備組織切片，經(jīng)PCR-Southern和原位雜交檢測證實185例胃癌中奮13例EBVaGCs，同吋選擇年齡、性別、病理類型和臨床分期與之相匹配的45例EBVnGCs作為研究對象。
6、58例胃癌病人平均年齡58歲（31?81歲），其中男性48例，女性10例，全部病例均經(jīng)病理診斷證實。1.2主要試劑和耗材：ReverseTranscriptionkit（美國Promega公司），TRIzol試劑（美國GIBCO公司），PCR反應(yīng)體系（上海生工生物技術(shù)服務(wù)有限公司），HybOnd-N+尼龍膜（美國Amershampharmacia公司），DigOligonucleotide3’-EndLabilingkit、CSPD、DNAMolecularWeightMarkerVlII,Digoxigenin-Lab
7、eled（徳國Roche公司），VEGF兔抗人單克隆抗體、SP通用型染色試劑盒（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）。1.3EBV相關(guān)基因的RT-PCR及Southernblotting檢測TRIzol法提取組織總RNA,參照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒要求的標(biāo)準(zhǔn)條件進(jìn)行cDNA合成，反轉(zhuǎn)錄所得cDNA用作PCR反應(yīng)的模板。EBV潛伏期基因和早期基因特異性引物和探針均參照文獻(xiàn)設(shè)計［1-3］，由北京賽百勝公司合成，引物和探針序列以及PCR產(chǎn)物長度見表1。應(yīng)用Roche公司提供的DigOligonucleotide3’-endLabelingKi
8、t對寡核符酸探針進(jìn)行標(biāo)記,具體步驟按試劑盒要求的標(biāo)準(zhǔn)條件進(jìn)行。PCR反應(yīng)體積為30μl,反應(yīng)體系為10×buffer3μl，MgCI21.5mmol/l，dNTPO.lmmol/L,上下游引物各0.5μm
