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《大鼠急性腎缺血再灌注對細胞內(nèi)鈣水平與細胞凋亡的影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、大鼠急性腎缺血再灌注對細胞內(nèi)鈣水平與細胞凋亡的影響【摘要】目的：觀察缺血再灌注損傷對腎細胞游離鈣（〔Ca2+〕i）水平和細胞凋亡的影響。方法：采用摘除大鼠左腎，鉗夾右側(cè)腎蒂的方法，建立急性缺血再灌注腎損傷模型，應(yīng)用Fura-2/AM熒光指示劑測定缺血再灌注大鼠腎細胞〔Ca2+〕i水平，流式細胞術(shù)檢測腎細胞凋亡率。結(jié)果：缺血再灌注不同時期腎細胞呈現(xiàn)不同程度Ca2+超載，與對照組相比差異顯著（P<0.01）；腎細胞凋亡率與對照組相比差異顯著（P<0.05）。結(jié)論：缺血再灌注不同時期腎細胞呈現(xiàn)Ca2+超載現(xiàn)象并與腎細胞凋亡率有正相關(guān)趨勢，
2、再灌注時間與腎細胞Ca2+超載呈正相關(guān)，提示再灌注損傷在加重細胞鈣超載同時增加了腎組織細胞凋亡，可能是再灌注損傷腎功能障礙的重要原因?！娟P(guān)鍵詞】缺血再灌注；腎組織；細胞鈣超載；細胞凋亡〔Abstract〕ObjectiveTostudytheeffectofrenalischemicreperfusioninjuryontracellularinonizedcalciumlevelandapoptosis.MethodsThemodelofrat'sacuterenalischemicreperfusioninjuryinedbyFura-2/
3、AMfluorescenceassay,andrenalcellapoptosiseasuredbyfloetry.Resultsparedicreperfusion.ConclusionAtdifferentperiodofrat'sacuterenalischemicreperfusioninjury,renalintracellular〔Ca2+〕ioverloadingandtherateofapoptosiseandrenalintracellular〔Ca2+〕ioverloadingightaggregateoverloadofi
4、ntracellular〔Ca2+〕ibydifferentmechanisms.腎缺血再灌注損傷綜合征是公認的移植腎重要的致病因子，不但與移植腎功能延遲恢復(fù)的發(fā)生密切相關(guān)，而且也與腎移植術(shù)后急性和慢性排斥反應(yīng)的發(fā)生和進展密切相關(guān)[1]。腎缺血再灌注損傷的發(fā)生機制，涉及諸多因素，其中細胞內(nèi)鈣代謝紊亂占有相當(dāng)重要的位置，可能與急性缺血缺氧造成細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)障礙及細胞膜性結(jié)構(gòu)改變有關(guān)。另外，急性缺血缺氧會引起細胞的急慢性損傷、死亡和細胞凋亡。細胞內(nèi)游離鈣（Ca2+）是介導(dǎo)細胞生理與病理作用的重要信使，其濃度異常升高會引起細胞的急慢性損傷和死亡，還可
5、引起組織細胞的氧化侵襲。因此，本實驗擬就缺血再灌注不同時期腎細胞內(nèi)鈣含量（〔Ca2+〕i）和腎細胞凋亡水平進行研究，為探討缺血再灌注損傷的發(fā)生機制提供實驗依據(jù)。1材料與方法1.1實驗動物及主要試劑1.1.1動物分組實驗動物系白求恩醫(yī)科大學(xué)實驗動物部提供，為封閉群動物。取雄性（避免雌激素對缺血的調(diào)節(jié)作用）購自Calbiochem公司。1.2實驗方法1.2.1手術(shù)方法及取材將標記Ca2+，熒光分光光度儀（日本，F(xiàn)4010型）檢測[2]。1.2.3細胞凋亡檢測細胞凋亡率檢測采用流式細胞儀（美國Coulter公司ILIT-Ⅱ型）檢測。1.3統(tǒng)計學(xué)方法全
6、部實驗數(shù)據(jù)采用SPSS8.0統(tǒng)計軟件，統(tǒng)計數(shù)據(jù)用x±s表示，組間分析采用方差分析和q檢驗。相關(guān)分析采用直線相關(guān)分析法。2結(jié)果2.1缺血再灌注腎組織病理改變?nèi)庋塾^腎組織在急性缺血及再灌注后腎皮髓質(zhì)微白并有輕度腫脹，余未見明顯大體改變。①光鏡下病理改變：急性缺血及再灌注1h組即可見腎小管上皮細胞發(fā)生腫脹、變性；再灌注2h和24h組見腎小管上皮細胞腫脹加劇，小管腔變窄，并出現(xiàn)上皮細胞壞死，腎小球基底膜增厚。②電鏡結(jié)果：急性缺血再灌注腎組織出現(xiàn)系列損傷性變化，近曲腎小管發(fā)生變性、小管腔表面微絨毛減少或消失、甚至發(fā)生溶解壞死；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脫顆粒擴張呈空泡狀、線
7、粒體腫脹畸形、嵴斷裂（圖1）；膜性細胞器發(fā)生髓樣變性；微血管腔明顯縮小或內(nèi)皮細胞溶解；腎小球3層膜明顯增厚，足突融合或消失等改變（圖2）。對照組腎組織細胞超微結(jié)構(gòu)未見異常改變。2.2缺血再灌注后腎功能的改變急性缺血再灌注損傷后腎臟功能有不同程度改變，本項實驗以血清Cr和BUN水平作為評價腎功能的檢測指標。在急性缺血和再灌注早期（再灌注1~2h），腎損傷改變明顯，與對照組相比血清Cr和BUN明顯增高（P<0.01），再灌注晚期（24h）,腎功能未見明顯改善，與對照組相比損傷仍很明顯（t=3.32，P<0.05），見表1。2.3急性缺血
8、及再灌注對腎細胞（〔Ca2+〕i）的影響應(yīng)用熒光分光光度儀檢測急性缺血及再灌注損傷腎細胞（〔Ca2+〕i）均明顯增高（t=3.489~7.74，P&l
