外源物質(zhì)snp,spd對(duì)鹽堿脅迫下射干幼苗傷害緩解作用的研究

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1、外源物質(zhì)SNP,Spd對(duì)鹽堿脅迫下射干幼苗傷害緩解作用的研究重慶三峽庫(kù)區(qū)植物生態(tài)與資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶400715)［摘要］為了鹽堿地開發(fā)利用及射干的栽培管理提供理論依據(jù)，該實(shí)驗(yàn)通過(guò)外施外源物質(zhì)SNP,Spd來(lái)緩解NaCI,Na2SO4,NaHCO3,Na2CO34種鹽的摩爾比為9：1：9：1,鹽濃度為100mmol?L-l的混合鹽堿脅迫對(duì)射干幼苗造成的傷害，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示高pH脅迫是造成鹽堿脅迫的主要因素，時(shí)間和各處理濃度之間有交互作用，鹽，堿脅迫之間有協(xié)同效應(yīng)。在100mmol?L-l的鹽堿脅迫下射干幼苗葉片中質(zhì)膜過(guò)氧化指標(biāo)(MDA,0-?2)和代謝產(chǎn)物(可溶性蛋白，可溶性糖，有機(jī)酸)的

2、含量均呈現(xiàn)不同程度的上升趨勢(shì)。經(jīng)過(guò)不同濃度的SNP,Spd處理后，MDA和0-?2顯著降低，并且有效提高了代謝產(chǎn)物的含量，其中SNPC0.05mmol?L?l)和Spd(0.5mmol?L-l)緩解傷害效果最佳。研究結(jié)果說(shuō)明SNP,Spd能有效緩減鹽堿脅迫對(duì)射干幼苗的傷害，提高射干幼苗的耐鹽堿能力，從而為鹽堿地的利用和射干種植提供科學(xué)基礎(chǔ)。［關(guān)鍵詞］鹽堿脅迫;外源物質(zhì);射干幼苗;傷害緩解;生理生化指標(biāo)［收稿日期］2014-05-27［基金項(xiàng)目］國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(30070080)［通信作者］*何平，教授，博士生導(dǎo)師，Tel:(023)68254122,E-mail：hepingl963

3、73@126.com［作者簡(jiǎn)介］徐夢(mèng)平，碩士研究生，Tel:18883342571,E-mail：Iliu2qian3han@163.com射干Belamcandachinensis(L.)DC.為鶯尾科多年生草本植物，是目前市場(chǎng)上緊缺的名貴中藥材之一［l］o近年來(lái)發(fā)現(xiàn)射干耐鹽堿，利用耐鹽堿的植物對(duì)土壤鹽堿化進(jìn)行改良是在眾多的生物措施中最為生態(tài)科學(xué)的⑵。選擇耐鹽堿的植物，了解植物的耐鹽堿機(jī)制，以及怎樣提高植物的耐鹽堿性已成為當(dāng)務(wù)之急，許多學(xué)者研究證明目前利用外源物質(zhì)提高植物的抗逆性是一條非常有用的途徑。本實(shí)驗(yàn)選用外源物質(zhì)SNP,Spd對(duì)鹽堿脅迫下射干幼苗進(jìn)行恢復(fù)，以明確射干對(duì)鹽堿脅迫緩解的

4、適宜濃度，從而為鹽堿地的利用以及射干開發(fā)與改良提供理論依據(jù)。1材料供試的射干種子由河北安國(guó)勝利藥材種子市場(chǎng)提供，經(jīng)何平教授鑒定為B.chinensis的干燥成熟種子。Spd為Sigma公司生產(chǎn)，外源一氧化氮供體硝普鈉（SNP）由韓國(guó)KAIST提供。2方法每盆留長(zhǎng)勢(shì)整齊且健壯的4株幼苗，待其長(zhǎng)至三葉一心時(shí)。選擇經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)證明的較為合適的濃度即NaCI,Na2SO4,NaHC03,Na2CO34種鹽的摩爾比為9：1：9：1,鹽濃度為100mmol?L-l溶液脅迫處理射干幼苗，并用SNP,Spd2種外源恢復(fù)物質(zhì)來(lái)做恢復(fù)實(shí)驗(yàn)，每種物質(zhì)共設(shè)計(jì)6個(gè)處理梯度，包括空白對(duì)照組CK1、混合鹽脅迫對(duì)照組CK2、

5、不同濃度SNP處理組T1?T4,不同濃度Spd處理組T5?T8,見表1。每處理設(shè)置3個(gè)重復(fù)，每隔2d向花盆內(nèi)添加恢復(fù)液直到花盆里面的土淋透為止。分別在鹽堿脅迫后第10,20,30天取樣測(cè)定，測(cè)量O-?2,MDA,可溶性蛋白，可溶性糖時(shí)均稱取0.3g鮮葉用于酶液提取，測(cè)量3種有機(jī)酸時(shí)準(zhǔn)確稱取0.1g干樣進(jìn)行HPLC的樣品制備。葉片中丙二醛（MDA）含量測(cè)定方法參照Velikova等的硫代巴比妥酸（TBA）檢測(cè)法[3];用輕胺氧化反應(yīng)測(cè)定0-?2含量⑷;可溶性蛋白值采用張志良的方法測(cè)定⑸;可溶性糖含量采用蔥酮比色法測(cè)定⑹;高效液相色譜法測(cè)量幼葉及根中3種有機(jī)酸含量：島津高效液相色譜儀（LC-2

6、0）,草酸、檸檬酸、丁二酸對(duì)照品購(gòu)于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心（HPLC298%）。色譜條件：PhenomenexC18柱（4.6mmX250mm，5?m）;流動(dòng)相為甲醇-NaH2PO4（3:97）,用磷酸表1對(duì)射干幼苗處理的不同組合Table1Belamcandachinensisseedlingstreatedbydifferentcombinations處理NaCI?Na2SO4?NaHCO3?Na2CO3（9：1：9：1）SNP/mmol?L-lSpd/mmol?L-lCK1000CK210000T11000.50T210010T31000.250T41000.50T510000.5T610

7、001T710000.25T810000.5調(diào)pH至2.0;流速1.0mL?min-l海次進(jìn)樣量15?L,檢測(cè)波長(zhǎng)210nm;柱溫25°C,使用前用0.45Pm濾膜過(guò)濾，超聲脫氣。在該色譜條件下進(jìn)行草酸、檸檬酸、丁二酸含量的測(cè)定。數(shù)據(jù)采用SPSS19.0軟件進(jìn)行重復(fù)度量和單因素方差分析。并用Duncanzs多重比較法檢驗(yàn)每個(gè)生理指標(biāo)(a=0.05)的差異顯著性。文中圖表均采用Excel2003軟件根據(jù)SPSS分析結(jié)果制作