阿米替林對神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓背角星形膠質(zhì)細(xì)胞的影響

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1、第三軍醫(yī)人學(xué)碩十學(xué)位論文阿米替林對神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓背角星形膠質(zhì)細(xì)胞的影響摘要神經(jīng)病理性疼痛是由于神經(jīng)系統(tǒng)病變引起的疼痛慢性狀態(tài)，還可伴有疼痛部位的感覺缺失、皮膚的自主神經(jīng)功能紊亂等癥狀。創(chuàng)傷、腫瘤、病毒感染、化療藥物、糖尿病、中風(fēng)、自身免疫性疾病等都可以引起神經(jīng)病理性疼痛。由于神經(jīng)病理性疼痛發(fā)病機(jī)制復(fù)雜、疼痛程度重、治療效果差、療程長，已成為困擾患者、影響生活質(zhì)量甚至造成個(gè)別患者厭世情緒的主要原因。近年來研究發(fā)現(xiàn)星形膠質(zhì)細(xì)胞參與疼痛調(diào)節(jié)和神經(jīng)信號傳遞處理、對腦的高級功能活動(dòng)具有重要作用。外周神經(jīng)損傷導(dǎo)致的神經(jīng)病理性疼痛模型伴有脊髓背角內(nèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞持續(xù)激活。谷氨酸是中樞

2、神經(jīng)系統(tǒng)主要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，參與脊髓疼痛信息的傳遞。神經(jīng)損傷后，感覺傳入纖維谷氨酸和天冬氨酸釋放增加，過度激活中樞神經(jīng)谷氨酸受體，導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)神經(jīng)元興奮性增加并激活膠質(zhì)細(xì)胞。突觸間隙內(nèi)谷氨酸的重?cái)z取主要依賴于星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)的興奮性谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體(EAATs)，而EAATs表達(dá)在神經(jīng)損傷或其他致病因素影響下發(fā)生改變。三環(huán)類抗抑郁藥是臨床上用于治療神經(jīng)性疼痛的一線藥物，其鎮(zhèn)痛和抗抑郁機(jī)制是不同的。近來阿米替林藥理機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)阿米替林可以抑制脊髓內(nèi)谷氨酸濃度增高，增加阿片藥物耐受模型大鼠脊髓內(nèi)EAATs表達(dá)。我們推測，阿米替林改變膠質(zhì)細(xì)胞和EAATs功能和表達(dá)可能是其發(fā)揮鎮(zhèn)

3、痛作用的另一條通路。研究神經(jīng)病理性疼痛模型使用阿米替林后膠質(zhì)細(xì)胞的改變可以進(jìn)一步闡明神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)病機(jī)制，找出抗抑郁藥鎮(zhèn)痛作用新的作用靶點(diǎn)，為丌發(fā)新的治療神經(jīng)病理性疼痛的抗抑郁藥物和設(shè)計(jì)藥物聯(lián)合使用方案提供依據(jù)。主要方法和技術(shù)路線：1．取雄性sD大鼠制備坐骨神經(jīng)分支選擇結(jié)扎模型或行假手術(shù)，分為對照組(A)、SNI組(B)、AMI組(C)、SNI+AMI組(D)，經(jīng)腹腔分別給予O．2ml生理鹽水(A、B)、lOmg／l(g阿米替林(c、D)，每日2次。術(shù)后1、3、5d取L3～L6脊髓，分別進(jìn)行星形膠質(zhì)細(xì)胞激活標(biāo)志物GFAP免疫熒光染色、westemblot和ImPCR檢測，

4、同時(shí)觀察機(jī)械痛閾值改變。5第三軍醫(yī)人學(xué)碩十學(xué)位論文2．雄性SD大鼠隨機(jī)分為4組：對照組(A)、SNI模型組(B)、AMI組(C)、SNI模型+AMI組(D)，經(jīng)腹腔注射O．2ml生理鹽水(A和B)、lOmg／kgAMI(C和D)，每同兩次。術(shù)后l、3、5d取各組大鼠L3～L6脊髓背角，檢測GLAST和GLT-1的蛋白和mRNA表達(dá)改變。主要結(jié)果和結(jié)論：1．與A組相比，B組大鼠機(jī)械痛閾值隨時(shí)問下降明顯(P

5、±0．306，1．36±O．433)和mRNA表達(dá)(O．55±O．135，0．86±O．163，1．32±O．317)隨時(shí)問逐漸增強(qiáng)；C組各項(xiàng)指標(biāo)與A組比較無明顯差異；D組大鼠機(jī)械痛閾值給藥后3、5d停止下降【(4．5±1．50)g，(4．9±1．41)g】，右側(cè)脊髓背角星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量增多和胞體增大，但是術(shù)后5天細(xì)胞數(shù)量[216±44．6(個(gè)／mm2)】不及B組大鼠，GFAP蛋白(O．79±0254，O．77±O．227)和mRNA(O．63±O．065，O．64±0．174)表達(dá)略增高，但不及B組(P

6、療神經(jīng)病理性疼痛作用。2．對SNI大鼠脊髓背角EAAITs表達(dá)分析發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，B組大鼠脊髓GLAST蛋白和mRNA表達(dá)先增加再降低，C組大鼠GLAST蛋白和mRNA表達(dá)隨時(shí)間逐漸增加，D組大鼠GLAST蛋白和mRNA表達(dá)明顯增高，但不隨時(shí)間變化。GLT-l表達(dá)改變與GLAST類似，B組大鼠脊髓內(nèi)GLT．1蛋白和mRNA術(shù)后1d明顯增高，但術(shù)后3、5d逐漸降低，C組大鼠GLT_1表達(dá)隨時(shí)間逐漸增加，D組大鼠術(shù)后GLT-l表達(dá)較A組明顯增高，但不隨時(shí)間變化。阿米替林可以逆轉(zhuǎn)SNI損傷后脊髓內(nèi)E從Ts蛋白表達(dá)下調(diào)，同時(shí)緩解神經(jīng)病理性疼痛癥狀，可能是治療神經(jīng)病理性疼痛的機(jī)制之

7、一。關(guān)鍵詞：神經(jīng)病理性疼痛；星形膠質(zhì)細(xì)胞；GFAP；阿米替林；谷氨酸．天冬氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體；谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體一l；抗抑郁藥；6第二軍醫(yī)人學(xué)碩十學(xué)位論文Innuence0famitriptylineonastrocytesinSpinalC0rddorsalhornsofratsinneuropathicpainAbstractNeuropathicpainreferstochronicpainthatoriginatesfrompathologyofthenerVoussystem，usuallyaccompan