wnt5a信號通路在胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用

《wnt5a信號通路在胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文Wnt5a信號通路在胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用姓名：卜海激申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：朱明華20120518wnt5a信號通路在胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用摘要胰腺癌是發(fā)生在胰腺外分泌腺體的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，占全身惡性腫瘤的1．4％，其中90％以上為胰腺導(dǎo)管腺癌。胰腺癌1年生存率為8％，5年生存率小于5％，中位生存時間僅4．6個月，死亡率居惡性腫瘤第8位。由于其臨床表現(xiàn)隱匿，缺乏敏感性高、特異性強的早期診斷手段，大多數(shù)患者就診時已屬中晚期，因而病程兇險，死亡率高，其中侵襲轉(zhuǎn)移是胰腺癌主

2、要致死原因。因此研究胰腺癌的生長侵襲轉(zhuǎn)移特點有重要的臨床應(yīng)用價值。wnt5a是近年來備受關(guān)注的Wnt家族成員。Wnts通過wnt信號傳導(dǎo)系統(tǒng)調(diào)控多種細胞功能如增殖、凋亡、分化、遷移及細胞極性等，在生長發(fā)育過程中，各成員呈現(xiàn)獨特的表達方式和不同的功能。Wnt5a因其廣泛參與多種作用途徑并在機體發(fā)育及疾病發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用而備受矚目。Wnt5a參與眾多的生理性和病理性的進程，在多種上皮和間葉性腫瘤中可見Wnt5a蛋白的異常表達。但與經(jīng)典型wnts在腫瘤中多表現(xiàn)為表達上調(diào)不同，Wnt5a在腫瘤組織中表達并不一致；對Wnt

3、5a蛋白功能的研究在不同腫瘤中也常常得到互相矛盾的結(jié)果。Wnt5a對腫瘤的發(fā)生發(fā)展是致癌還是抑癌因素，眾多的實驗得出了截然不同的結(jié)論。Wnt5a在結(jié)直腸癌、神經(jīng)母細胞瘤及白血病等腫瘤中起抑癌作用，并表達下調(diào)。Wnt5a下調(diào)與更高的腫瘤分級正相關(guān)，且在不同腫瘤亞型中是一個獨立的預(yù)后不良的因素。而在皮膚黑色素瘤、乳腺癌細胞、胃癌、胰腺癌、非小細胞肺癌、前列腺癌等腫瘤中Wnt5a蛋白過表達且影響腫瘤的遷移和侵襲能力，呈現(xiàn)癌基因的特性。因此Wnt5a在不同的腫瘤中有截然不同的表達方式和功能定位。目前在胰腺癌中，對Wnt5a蛋白表達

4、的研究報道并不一致，其功能和作用機制仍未清楚。為了研究Wnt5a蛋白在胰腺導(dǎo)管腺癌中的表達形式，明確Wnt5a在胰腺導(dǎo)管腺癌中的功能定位，初步探討其作用機制，我們設(shè)計了本課題。目的：觀察Wnt5a蛋白在胰腺癌組織中的表達狀況，并通過細胞轉(zhuǎn)染技術(shù)建立穩(wěn)定Wnt5a蛋白過表達和低表達的胰腺癌細胞株，檢測不同Wnt5a蛋白表達狀況對胰腺癌細胞增殖遷移侵襲等生物學(xué)行為的影響，初步探討wnt5a蛋白影響侵襲轉(zhuǎn)移的途徑。方法：①通過組織芯片wnt5a蛋白免疫組化染色，分析wnt5a蛋白在胰腺癌腫瘤組織與癌旁組織中表達的差異；并結(jié)合臨床

5、病理參數(shù)分析Wnt5a與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系；對病例資料進行隨訪觀察，根據(jù)不同Wnt5a蛋白表達狀況作生存分析。第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文(D構(gòu)建wnt5a過表達和干擾質(zhì)粒，通過脂質(zhì)體法和電穿孔法將過表達和干擾質(zhì)粒導(dǎo)入胰腺癌細胞株P(guān)ANC．1和BXPC．3中，篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)抗性克隆，Westem-Blot驗證穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株的wnt5a蛋白表達狀況。(D觀察不同wnt5a蛋白表達水平的胰腺癌細胞株的生物學(xué)行為：通過MTT法檢測胰腺癌細胞株的生長增殖能力；克隆形成實驗檢測腫瘤細胞單個細胞體外增殖能力；流式細胞技術(shù)檢測細胞周期分布和細胞凋

6、亡情況；劃痕實驗和TraIlswen實驗檢測細胞遷移和侵襲能力；裸鼠原位成瘤實驗觀察各組細胞在裸鼠胰腺原位種植后成瘤及發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移能力。(D利用熒光實時定量PcR技術(shù)和wbstemBlot方法檢測轉(zhuǎn)染后細胞EMT關(guān)鍵基因的mI玳A和蛋白水平的表達；⑤WestemBlot方法檢測Wnt5a重組蛋白處理后Wnt5a信號通路相關(guān)蛋白的表達；CIAP進行去磷酸化處理。結(jié)果：①通過對134例胰腺癌組織芯片的wnt5a蛋白免疫組化染色發(fā)現(xiàn)胰腺癌癌旁組織中Wnt5a蛋白表達陽性率為16．4％；癌組織陽性率為81．3％；癌與癌旁組織中Wn

7、t5a蛋白表達的陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P

8、示：與相應(yīng)空載體組相比，兩種胰腺癌細胞株過表達組增殖速度均加快，而干擾組則生長受抑制；平板克隆實驗顯示兩種細胞的過表達組體外單個細胞克隆形成能力明顯增強；PANC．1干擾組克隆形成能力降低，BXPC一3干擾組克隆形成能力與空載體組間無顯著性差異。細胞周期實驗顯示過表達組及干擾組與相應(yīng)空載體組之間周期分布