鞘內(nèi)注射reelin基因干擾慢病毒載體對大鼠慢性神經(jīng)病理性疼痛的研究

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1、分類號Ｒ４密級公開—■—Ｉ．—Ｉ．？ＵＤＣ６１０學(xué)校代碼１０巧５減為＃義拿ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＳＯＵＴＨＣＨＩＮＡ碩：ｔ學(xué)位論文（專業(yè)學(xué)位）鄰內(nèi)注射Ｒｅｅ１ｉｎ基因干扼暖病毒載體對大鼠慢性神筵病理性疼痛的研究研究生姓名：陽巧云指導(dǎo)教師、職稱：ｒ昕主任醫(yī)師學(xué)科專業(yè)：晦床醫(yī)學(xué)（麻醉學(xué)）研究方向：神經(jīng)病理性疼痛所在學(xué)院一臨床學(xué)院：第二０—■五年五月／？騎內(nèi)注射Ｒｅｅｌｉｎ基因干擾慢病毒載體對

2、大鼠慢性神經(jīng)病理性疼痛的研究＇ｄ論文作者簽名ｆ１Ｐ？Ａａ指導(dǎo)教師簽名：］ｉ＼＾ｊ論文評閱人；１張朝辟，，副教授，碩導(dǎo)南華大學(xué)評閱人２；劉丈捷，副教授，碩導(dǎo)，南華大學(xué)答辯委員會主席：）馬權(quán)強，教授，博導(dǎo)，中山大學(xué)委員１：莫利求，中山大學(xué)，教授，碩導(dǎo)委員２；田紹義，郵標(biāo)，碩導(dǎo)，畝華大學(xué)委員３；祖化宇，副郵搜，碩導(dǎo)，南華大學(xué)委員４；侯立力，副教授，碩導(dǎo)，南華大學(xué)答辯日期：２０１５年５月８日Ｉ南華大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)

3、性聲明本人聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加ｔｕ標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得南華大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對本研究所作的貢獻均已在論文中作了明確的說明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承戶擔(dān)。作者簽名；商於為／年芝石円ｊ＾＾本南華大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書學(xué)位論文是本人在南華大學(xué)攻讀（博／碩）±學(xué)位期間在導(dǎo)師指導(dǎo)

4、下完成的學(xué)位論文。本論文的研究成果歸南華大學(xué)所有，本論文的研究內(nèi)容不得Ｗ其它單有權(quán)位保的名義發(fā)表。本人同意南華大學(xué)有關(guān)傑留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，目Ｐ：學(xué)校或留學(xué)位論文，允許學(xué)位論文被査閱和借閱；學(xué)?？桑蓿蓿紝W(xué)位論文的全部湖部分內(nèi)容，可采用復(fù)印、縮印或其它手段保留學(xué)位論文；學(xué)?？筛鶕?jù)國家或論文南省全有文關(guān)部口規(guī)定送交學(xué)位論文。同意學(xué)校將論文加入《中國優(yōu)秀博碩±學(xué)位享數(shù)據(jù)庫》，并按《中國優(yōu)秀博碩±學(xué)位論丈全文數(shù)據(jù)庫出版章程》規(guī)定位受相關(guān)權(quán)益。同意授權(quán)中國科學(xué)信息技術(shù)研

5、究所將本學(xué)位論文收錄到《中國學(xué)文論文全文數(shù)據(jù)庫》，并通過網(wǎng)絡(luò)向狂會公眾提供信息服務(wù)。對于涉密的學(xué)位論，解密后適用該授權(quán)。＜作者簽名：陽］＾先劉＾年＾月７曰導(dǎo)師簽名月曰ｔｆ本實驗由國家自然科學(xué)基金資助（NO81300971）鞘內(nèi)注射Reelin基因干擾慢病毒載體對大鼠慢性神經(jīng)病理性疼痛的研究研究生：陽巧云導(dǎo)師：曠昕主任醫(yī)師中文摘要：目的探討鞘內(nèi)注射Reelin基因干擾慢病毒載體(LV-Reelin-RNAi)對慢性坐骨神經(jīng)壓迫性損傷（chronicconstrictioninj

6、ury，CCI）疼痛大鼠脊髓水平Reelin的表達變化及疼痛行為學(xué)的影響。方法鞘內(nèi)置管成功后無運動障礙的SD雄性大鼠144只，體重200-270g，隨機分為4組：Sham組(n=36)，CCI組(n=36)，RNAi組(n=36)和空載體組(n=36)。Sham組大鼠只暴露右側(cè)坐骨神經(jīng)后不結(jié)扎，而其他三組大鼠在暴露右側(cè)坐骨神經(jīng)后，用4.0含鉻羊腸線輕輕的結(jié)扎四道以制造慢性坐骨神經(jīng)壓迫性損傷疼痛模型。術(shù)后第1天，各組分別鞘內(nèi)注射生理鹽水15μl、生理鹽水15μl、LV-Reelin-RNAi5μl

7、+生理鹽水10μl、空載體5μl+生理鹽水10μl。各組大鼠均于術(shù)前1d、術(shù)后1d、4d、7d、10d、14d和21d測量雙側(cè)后足底機械縮足閾值（pawwithdrawalmechanicalthreshold,PWMT）和熱縮足潛伏期（pawwithdrawalthermallatency,PWTL）。各組在第7、14、21天取腰膨大，采用QPCR、Westernblot和石蠟切片免疫組化（Immunohistochemistry-paraffinsections，IHC-P）檢測脊髓背角Re

8、elinmRNA和蛋白的表達。結(jié)果術(shù)前各組大鼠PWMT和PWTL無顯著性差異；CCI模型大鼠手術(shù)測術(shù)后各組各時間點PWMT和PWTL均明顯降低（P<0.05）,手術(shù)側(cè)脊髓背角ReelinmRNA的表達量和ReelinI蛋白表達量CCI術(shù)后明顯減少（P<0.05）。鞘內(nèi)注射LV-Reelin-RNAi可進一步降低PWMT和PWTL。與之相對應(yīng)，大鼠右側(cè)脊髓背角ReelinmRNA和蛋白的表達也進一步降低（P<0.05）。鞘內(nèi)注射空載體對慢性神經(jīng)病理性疼痛大鼠的疼痛行為學(xué)、ReelinmRNA和Re