腎衰膠囊改善慢性腎衰大鼠腎間質(zhì)纖維化的影響

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1、腎衰膠囊改善慢性腎衰大鼠腎間質(zhì)纖維化的影響作者：李蓮花,李淑菊,王今朝,于卓,張佩青【摘要】目的觀察腎衰膠囊改善腎間質(zhì)纖維化的作用。方法采用腺嘌呤混懸液制作大鼠腎功能衰竭模型,通過(guò)中藥腎衰膠囊治療,觀測(cè)血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-β1)及病理改變。結(jié)果腎衰膠囊組與尿毒清組比較,能顯著降低SCr、BUN(P<0.05),顯著減少腎組織對(duì)TGF-β1的表達(dá)(P<0.05),改善腎臟纖維化程度。結(jié)論腎衰膠囊對(duì)改善慢性腎功能衰竭大鼠腎間質(zhì)纖維化有一定的治療作用?！娟P(guān)鍵詞】腎衰膠囊；慢性腎功能衰竭；腎間質(zhì)

2、纖維化；動(dòng)物模型慢性腎功能衰竭(CRF)是慢性腎臟疾病引起的腎功能損害,腎臟疾病進(jìn)展到CRF的機(jī)制尚未完全闡明,但近年的研究顯示腎間質(zhì)病變與CRF進(jìn)展關(guān)系密切,幾乎所有腎臟疾病進(jìn)展到腎功能衰竭終末期都會(huì)出現(xiàn)腎臟纖維化?！　?材料和方法8　　1.1動(dòng)物　　選用雄性Wistar大鼠,體重200～240g,購(gòu)自黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心?！　?.2藥物及試劑　　腎衰膠囊,0.5g/粒,黑龍江省中醫(yī)研究院制劑室生產(chǎn)并提供(批號(hào)：黑藥制字[2004]Z第0010號(hào))。尿毒清顆粒,5g/袋,廣州康臣藥業(yè)有限公司生產(chǎn)(批號(hào)z10970122)。腺嘌呤

3、,50g/瓶,美國(guó)AMRESCO公司生產(chǎn)(批號(hào)0272B31)。兔抗大鼠TGF-β多克隆抗體,武漢博士德生物工程公司提供。山羊抗兔IgG抗體-HRP多聚體,北京中山生物技術(shù)有限公司提供?！　?.3分組　　取Wistar雄性大鼠60只,進(jìn)入實(shí)驗(yàn)后適應(yīng)性飼養(yǎng)1周,隨機(jī)分為5組,每組12只。即正常組、模型組、尿毒清組、腎衰膠囊低劑量治療組、腎衰膠囊高劑量治療組。　　1.4造模及給藥　　8　　除正常組外,其余組予2.5%腺嘌呤混懸液,按250mg/(kg?d)灌胃,正常組給予等量蒸餾水,連續(xù)用藥21d,第22天眶底靜脈叢取血0.5mL,測(cè)血肌酐(

4、SCr)、尿素氮(BUN),證實(shí)造模成功,造模過(guò)程中大鼠死亡8只。造模結(jié)束后開始治療,大鼠給藥劑量按每公斤體重占體表面積比值算得,腎衰膠囊低劑量組為臨床等效組,按1.35g/(kg?d)灌胃,濃度為13.5%,高劑量組為其3倍,濃度為40.5%。尿毒清組按1.81g/(kg?d)灌胃,濃度為20%。正常組、模型組給予2mL蒸餾水灌胃。共治療60d,治療過(guò)程中大鼠自由進(jìn)食、水。治療中模型組死亡2只,尿毒清組死亡1只。　　1.5實(shí)驗(yàn)取材　　禁食水24h,摘眼球取血5～6mL,取血后脫頸椎處死大鼠,迅速腹部開口剖取雙腎,縱向切開右腎,取一部分投

5、入4%多聚甲醛固定24h,切成厚度為2mm的組織塊,梯度酒精脫水,石蠟包埋、切片,脫蠟后進(jìn)行HE染色及免疫組織化學(xué)檢測(cè)?！　?.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法　　采用SPSS11.5forwindows統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果用x±s表示,多組間比較采用單因素方差分析,兩兩比較用q檢驗(yàn),等級(jí)資料用Ridit分析。8　　2結(jié)果　　2.1實(shí)驗(yàn)大鼠造模后SCr、BUN比較　　(見(jiàn)表1)表1造模后各組大鼠SCr、BUN比較(略)注：與正常組比較,※P<0.01?！　?.2用藥后各組大鼠Scr、BUN比較　　(見(jiàn)表2)表2用藥后各組SCr、BUN比較(略)注

6、：與模型組比較,△P<0.05,△△P<0.01；與尿毒清對(duì)照組比較,○P<0.05(下同)?！　?.3免疫組化　　應(yīng)用CMIAS多功能真彩色病理圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行半定量分析,高倍視野(200×)據(jù)染色面積和程度進(jìn)行半定量分析。無(wú)陽(yáng)性染色(-),輕度陽(yáng)性染色(+),中度染色(++),重度陽(yáng)性染色(+++),分別對(duì)結(jié)果賦分：1分(-),2分(+),3分(++),4分(+++)。PBS代替一代作陰性對(duì)照,正常腎組織在髓質(zhì)交界處的腎小管上皮細(xì)胞胞漿有少量表達(dá),模型對(duì)照組大鼠TGF-β1表達(dá)遍布皮髓質(zhì)處損傷腎小管上皮細(xì)胞胞漿,2,

7、8二羥基腺嘌呤結(jié)晶周圍增生的單核巨噬細(xì)胞也有表達(dá),經(jīng)治療表達(dá)減弱,其中高劑量組表達(dá)最弱。結(jié)果見(jiàn)表3。表3用藥后各組大鼠TGF-β81表達(dá)比較(略)　　2.4腎臟組織HE染色觀察　　正常組中腎小管上皮細(xì)胞排列整齊,腎間質(zhì)無(wú)纖維化組織增生,腎小管管腔無(wú)結(jié)晶物質(zhì)沉積。模型組腎小管上皮細(xì)胞萎縮、變性、壞死、腎小管部分?jǐn)U張,管腔內(nèi)可見(jiàn)多數(shù)棕褐色結(jié)晶物質(zhì)沉積,間質(zhì)大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),間質(zhì)纖維組織成束狀、成片狀增生。尿毒清對(duì)照組與腎衰膠囊低劑量組中腎小管擴(kuò)張,部分萎縮,間質(zhì)有部分炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),纖維組織中度增生,腎小管管腔可見(jiàn)較多的棕褐色結(jié)晶。腎衰膠囊高劑

8、量組：腎小管上皮細(xì)胞輕度萎縮、變性,間質(zhì)有極少量的炎癥細(xì)胞散在分布,纖維組織增生不明顯,個(gè)別管腔中有棕褐色結(jié)晶?！　?討論　　CRF是由于各種原因?qū)е缕⒛I受損,二便失司,三焦氣化失調(diào),分清泌濁