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《鈣釋放激活鈣離子通道在抗血管平滑肌增殖中的作用》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、摘要目的：鑒定血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)存在鈣釋放激活鈣電流(CRAC)和鈣庫(kù)操控鈣離子內(nèi)流(SOCE)，并進(jìn)一步研究CRAC阻滯劑2-APB在VSMC增殖和表型轉(zhuǎn)換中的作用。方法：使用免疫細(xì)胞化學(xué)、膜片鉗、鈣離子成像和RNA干擾技術(shù)證實(shí)VSMC上存在由Orail／STIMl介導(dǎo)的CRAC和SOCE。運(yùn)用BrdU共培養(yǎng)和流式細(xì)胞術(shù)量化VSMC增殖、測(cè)定細(xì)胞周期。并比較釓、Rapamycin和2-APB對(duì)VSMC增殖、表型轉(zhuǎn)換的作用。結(jié)果：我們運(yùn)用免疫細(xì)胞化學(xué)，在大鼠主動(dòng)脈血管平滑肌系A(chǔ)7r5證實(shí)了Orail、STIMl的存在，并記錄到典型的CRAC鈣離子電流。在原代培養(yǎng)的大鼠V
2、SMC上記錄到SOCE，且RNA干擾技術(shù)沉默Orail后可顯著抑制其SOCE。這表明大鼠VSMC中的CRAC／SOCE由Orail／STIMl介導(dǎo)。我們優(yōu)化了一種簡(jiǎn)單方法，即使用5％胎牛血清(FBS)來(lái)建立VSMC增殖模型。在我們的實(shí)驗(yàn)條件下，基本增殖率約為25％。5gM2．APB使得增殖率升至62．81％，而50洲2-APB使增殖率降至10．28％(p<0．01)。100pM2-APB幾乎完全阻止BrdU的摻入。運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)一步量化，以BrdU摻入率為測(cè)量指標(biāo)發(fā)現(xiàn)，基本增殖率為27．35+4．49％，100gM2-APB使得增殖率降至3．81+0．28％。這些結(jié)果提示CR
3、AC相對(duì)特異性抑制劑2-APB抑制VSMC增殖。形態(tài)學(xué)上，我們發(fā)現(xiàn)高濃度的2-APB可將VSMC從合成表型逆轉(zhuǎn)為收縮表型。典型地，經(jīng)培養(yǎng)的VSMC體積和細(xì)胞核會(huì)越來(lái)越大，呈上皮樣(菱形)。加入2-APB(100gM)后，這種表型轉(zhuǎn)換被逆轉(zhuǎn)，呈收縮表型，即細(xì)胞變小、呈梭形。細(xì)胞周期分析發(fā)現(xiàn)，2-APB(100州)處理后大多數(shù)細(xì)胞停滯在G1／G0期。我們對(duì)比了Rapamycin和2-APB對(duì)VSMC的作用。10肛MRapamycin抑制VSMC增殖，而50gM時(shí)大部分細(xì)胞被殺死而不是增殖受抑制，提示可能是細(xì)胞凋亡。使用本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ臀窗l(fā)現(xiàn)氯化釓(GdCl3，10rtM)對(duì)細(xì)胞增殖或表型
4、轉(zhuǎn)換有明顯作用。結(jié)論：我們的結(jié)果表明，在大鼠VSMC上，CRAC／SOCE由omil／ST蹦lII摘要介導(dǎo)。使用2-APB抑制CRAC／SOCE可改善VSMCs增殖、逆轉(zhuǎn)表型轉(zhuǎn)換。CRAC／SOCE或可成為抗血管增殖療法的新藥物靶點(diǎn)。換關(guān)鍵詞：鈣釋放激活鈣離子通道；2-APB；血管平滑肌細(xì)胞；增殖；表型轉(zhuǎn)IIIAbstractObjectives：Toidentifyca2+_releaseactivatedC一十currents(CRAC)andstore-operatedCa2十entry(SOCE)invascularsmoothmusclecells(VSMC)andt
5、oftlrtherinvestigateeffectsof2-APB，aCRACblocker,onVSMCproliferationandphenotypereversal．Methods：Immunocytochemistry,patch-clamping,Ca+imagingandRNAinterference(RNAi)techniquewereusedtoidentifythepresenceofOral1／STIM1-mediatedCRACandSOCEinVSMC．BrdUincorporationapproachandFlowcytometrywereused
6、toquantifyVSMCproliferationandcellcycledetermination．EffectsofGadolinium，Rapamycinand2-APBwerecomparedonVSMCproliferationandphenotypeswitch．Results：UsingrataorticsmoothmusclecelllineA7r5，wedetectedthepresenceofOral1andSTIMlbyimmunocytochemistryandwealsorecordedCa2+currentstypicalofCRAC．Inpri
7、marycultureratVSMC，wewereabletomeasureSOCEthatislargelyinhibitedaftersilencingofOrai1usingRNAitechnique，suggestingCRAC／SOCEinratVSMCismediatedbyOrail／STIM1．WeoptimizedasimplerVSMCproliferationmodelinvolvingcultureofVSMCin5％fetalbovineserum(FBS)．Ino
