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1、蛋白A親和層析介質（征求意見稿）編制說明《蛋白A親和層析介質》國家標準起草工作小組二〇一九年一月21《蛋白A親和層析介質》國家標準編制說明（征求意見稿）一、任務來源本國家標準的制定任務列入國家標準化管理委員會專項《國家質量基礎的共性技術研究與應用》項目《生物產業(yè)共性技術標準研究》中課題《海洋生物產品質量控制與檢測技術標準研究》，項目編號“2016YFF0202304”。本項任務由中國標準化研究院提出并歸口，定于2019年完成。本標準起草工作組由中國科學院過程工程研究所等單位共同組成。二、目的和意義單抗藥物對生產制造純化工藝的效能和
2、成本要求非常高，單抗分離純化成本占其生產總成本的50-70%，其中蛋白A親和層析介質是其生產的關鍵原材料之一，其性質和成本將決定單抗產品的最終生產成本、純度和收率。目前，80%以上的抗體純化使用蛋白A親和層析。蛋白A親和層析介質的載量、穩(wěn)定性等是單抗純化選擇介質時的首要考慮。蛋白A來源于金黃色葡萄球菌的一個株系，它含有5個可以和抗體分子Fc段特異性結合的結構域。將蛋白A偶聯至基質上（以瓊脂糖基質為主）制成蛋白A親和層析介質，可以與抗體特異性結合，選擇性極高，一步親和層析可達到95%以上的純度。蛋白A親和層析因特異性強、操作簡單、處
3、理量大等優(yōu)勢，已成為抗體藥物研發(fā)和生產階段的核心純化步驟。蛋白A親和層析介質作為單抗藥物生產過程的關鍵分離材料之一，其性質和成本決定單抗產品的最終純度、收率和生產成本。我國當前尚未建立相應的國家及行業(yè)標準，國內市場上的蛋白A親和層析介質產品質量良莠不齊，缺乏產品生產、檢驗和質量規(guī)范。這在一定程度上限制了我國蛋白A親和層析介質的發(fā)展及相關層析技術的應用，更阻礙了國內單抗產業(yè)的發(fā)展水平。因此建立蛋白A親和層析分離介質的國家標準，對于規(guī)范蛋白A親和介質行業(yè)，推進層析技術應用，以及促進單抗產業(yè)發(fā)展，均具有重要的理論和現實意義。21目前，蛋
4、白A親和層析介質的性能參數測定方法多種多樣，以動態(tài)載量測定方法為例，一種是將介質裝柱并連在層析儀上，平衡，上樣抗體，待流出液濃度與上樣濃度相等時上樣結束，依次經淋洗、洗脫，收集洗脫液，測定洗脫液體積及洗脫液濃度，計算洗脫載量。另一種則是將介質裝柱并連接到層析儀上，平衡、上樣抗體，根據穿透曲線，以5%穿透處介質對抗體的吸附量進行載量計算。還有則是在第二種方法的基礎上按照10%穿透處介質對抗體的吸附量進行載量計算。這三種方法測定同一介質樣品得到的結果均有明顯差異。由于測定方法不同產生的類似問題也出現在其他參數測定上。這些差異對于介質的
5、應用存在諸多不便。因此，建立蛋白A親和層析介質國家標準，能夠規(guī)范蛋白A層析介質的生產與檢驗過程，促進介質和相關層析技術在單抗生產等領域的應用，并對推動我國層析介質在世界范圍內的應用均具有重要意義。三、標準制定原則（一）標準編制原則蛋白A親和層析介質屬于生物體系分離材料，重點圍繞介質的主要性能要求，設定相應技術內容。在確保產品質量的基礎上，充分體現產品的特點。（二）標準制訂主要依據1、標準編寫遵循GB1.1-2009《標準化工作導則第1部分：標準的結構和編寫規(guī)則》的有關要求。2、標準編寫內容參考我國與化學品相關的法規(guī)、標準，包括GB
6、/T601化學試劑標準滴定溶液的制備、GB/T603化學試劑試驗方法中所用制劑及制品的制備等等。四、標準主要技術內容（一）標準適用范圍的說明本標準規(guī)定了蛋白A親和層析介質的質量要求、檢測方法、檢驗規(guī)則、標志、包裝、運輸和貯存的標準。本標準適用于骨架為瓊脂糖微球的分離介質的生產與檢測。（二）內容提要蛋白A親和層析介質的主要理化性質包括外觀、粒徑及分布、耐受壓力強度測試、配基密度、動態(tài)載量、微生物污染等。2.1外觀2.1.1方法提要采用光學顯微鏡觀測蛋白A親和層析介質的外觀形貌。光學顯微鏡使用普及率高，可觀測范圍一般在數微米到數百微米
7、之間，樣品處理過程和觀測過程都簡便易行，觀測結果21清晰、重復性好，是常用的材料外觀表征方法之一[1]。蛋白A親和層析介質的外觀形貌主要包括球形和透明性，其尺寸大小在光學顯微鏡的測量范圍內[2]。2.1.2試劑和材料實驗用水應符合GB/T6682-1992中三級要求。光學顯微鏡。砂芯漏斗為G3（4.5-9μm）。真空泵極限真空0.10MPa。2.1.3樣品前處理用量筒量取5mL蛋白A親和層析介質，置于50mL砂芯漏斗中。用三級水清洗5次，每次2min，抽干5min。將洗凈的蛋白A親和層析介質置于燒杯中，介質上應有2cm的三級水?；?/p>
8、勻后得到蛋白A親和層析介質與水的混合體系。2.1.4樣品觀測用塑料吸管吸取1mL蛋白A親和層析介質與水的混合體系置于載玻片上，調整顯微鏡放大倍數。以視野里80%以上面積均為介質為標準，用塑料吸管增減載玻片上的微球，最后用蓋玻片壓上。調節(jié)光學顯微鏡焦
