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《hPIN1基因酵母雙雜交表達(dá)載體的構(gòu)建及其毒性與自激活效應(yīng)檢測(cè).doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、此文檔收集于網(wǎng)絡(luò)，如有侵權(quán)，請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除hPIN1基因酵母雙雜交表達(dá)載體的構(gòu)建及其毒性與自激活效應(yīng)檢測(cè)孟祥貴1黃軼2 楊梅華3劉立杰1(1第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院健康體檢中心，重慶400037；2重慶醫(yī)科大學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室,重慶市生化與分子藥理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶400016；3第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院神經(jīng)外科，重慶400037)[摘要]目的 克隆人肽基脯氨酰順?lè)串悩?gòu)酶PIN1基因，構(gòu)建酵母雙雜交系統(tǒng)表達(dá)載體，并檢測(cè)其表達(dá)產(chǎn)物對(duì)酵母細(xì)胞有無(wú)毒性作用及對(duì)報(bào)告基因有無(wú)激活作用。方法運(yùn)用RT-PCR從人胃癌組織中擴(kuò)增PIN1基因片段,平端克隆入環(huán)狀自連pMD18-T載體，測(cè)序鑒定后
2、以此為模板再次擴(kuò)增相應(yīng)片段克隆入酵母雙雜交載體pGBKT7與pGADT7中。醋酸鋰法轉(zhuǎn)化酵母菌AH109,檢測(cè)誘餌蛋白對(duì)酵母AH109有無(wú)細(xì)胞毒性及對(duì)報(bào)告基因有無(wú)激活作用。結(jié)果成功克隆出序列正確的PIN1基因,并正確構(gòu)建PIN1基因的酵母雙雜交表達(dá)載體。PIN1蛋白對(duì)酵母菌AH109無(wú)細(xì)胞毒性,對(duì)報(bào)告基因亦無(wú)自激活作用。結(jié)論可以利用酵母雙雜交系統(tǒng)來(lái)研究“誘餌”P(pán)IN1相互作用的蛋白。[關(guān)鍵詞]:基因；克?。浑幕滨ｍ?lè)串悩?gòu)酶，PIN1；酵母雙雜交中圖法分類(lèi)號(hào)：Q782文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：AExpressionandconstructionofyeastexpressionplasmi
3、dcontaininghumanPIN1geneinyeasttwo-hybridsystemMENGXiang-gui1,HUANGYi2,YANGMei-hua3,LIULi-jie11HealthScreeningCenter，XinqiaoHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity，Chongqing400037，China;2DepartmentofBiochemistryandMolecular，ChongqingBiochemicalandPharmacologicalKeyLaboratory,ChongqingMedical
4、University，Chongqing400016，China，3DepartmentofNeurosurgery，XinqiaoHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity，Chongqing400037，China.[Abstract]AIM:ToconstructyeastexpressionvectorcontaininghumanPIN1geneinordertoscreenitsinteractionproteinsinyeasttwo-hybrid.MethodsHumanPIN1genewasamplifiedbyRT-PCR
5、fromhumangastriccancertissueandinsertedintopMD18-Tbyblunt-blunt——————————此文檔僅供學(xué)習(xí)與交流此文檔收集于網(wǎng)絡(luò)，如有侵權(quán)，請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除作者簡(jiǎn)介：孟祥貴,男，教授，主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，Tel：（023）68755674，Email：yihuang828@yahoo.com.cn通訊作者：黃軼,男，講師，Tel：（023）68485398，Email：yihuang828@yahoo.com.cnligation.Afterverifiedbysequencing,thebaitpGBKT7-PIN1and
6、pGADT7-PIN1wereconstructedwithpMD18-T-PIN1astemplate.PIN1baitplasmidwassubsequentlytransformedintoyeastcellAH109,anditstoxicitytoAH109andtranscriptionalactivatitiontoreportergeneweretestedwithyeasttwo-hybridsystem..Results:HumanPIN1genewasabtainedsuccessfully.SequenceanalysisrevealedthatPIN1
7、genewerein-frameinsertedintopGBKT7andpGADT7vectors.ItsexpressionproductshowedtobenontoxictoAH109anddidnotactivatethereportergenes.ConclusionTheplasmidpGBKT7-PIN1canbeappliedasabaittotraptheinteractionproteinfromcDNAlibrarybyusingyeasttwo-hybrid.[Ke
