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1、TFPI-2在食管鱗癌中的表迖及其臨床意義【摘要】目的：探討TFPI-2在食管鱗癌組織中的表達(dá)及其臨床意義。方法：采用免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry,IHC)SP法測(cè)定TFPI-2在食管鱗癌組織、癌旁組織、正常食管組織中的表迗。結(jié)果：TFPI-2表達(dá)陽(yáng)性指數(shù)在食管鱗癌組織、癌旁組織、正常食管組織中分別為(16.25±9.57)%,(22.41±7.24)%,(27.76±5.30)%。食管鱗癌中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、大小、浸潤(rùn)深度、TNM分期及腫瘤的分化程度與TFPI-2的表達(dá)陽(yáng)性
2、指數(shù)則呈負(fù)相關(guān)(rs分別=-0.315、-0.444、-0.647、-0.772、-0.292)。結(jié)論：TFPI-2與食管鱗癌的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移、侵襲有關(guān)，是判斷食管癌預(yù)后的有效指標(biāo)。【關(guān)鍵詞】食管鱗癌；TFPI-2；免疫組織化學(xué)【Abstract】Objective：ToexploretheexpressionandclinicalsignificanceofTFPI-2inesophagealsquamouscellcarcinoma.Method:Theexpressionandclinical
3、significanceofTFPI-2innormalesophagealepithelium,adjacenttissuesandesophagealsquamouscellcarcinomabyImmunohistochemistry.Result:ThepositiveindexoftheexpressionofTFPI-2innormalesophagealepithelium,andadjacenttissues,andESCCswererespectively（27.76±5.30
4、）%，（22.41±7.24）%，（16.25±9.57）%.ThepositiveindexoftheexpressionofTFPI-2innormalesophagealepithelium，andadjacenttissues,andESCCsshowedanincreasingtrend,theresultwassignificant（P5cm）的正常食管組織作為正常對(duì)照組。1.2方法1.2.1試劑兔抗人VEGFR-3多克隆抗體：購(gòu)自上海普林斯頓生物科技發(fā)展有限公司（1:100）。兔抗
5、人TFPI-2多克隆抗體：購(gòu)自北京義翹神州生物技術(shù)有限公司（1:200）。通用型SP-9000檢測(cè)試劑盒（549257A）：購(gòu)自北京中杉金橋公司；3，3-二氨基對(duì)二氨基聯(lián)苯（3,3-Diaminobenzidine,DAB）顯色試劑盒（549257A）：購(gòu)自北京中杉金橋公司。1.2.2免疫組化染色步驟（SP法）（1）切片烤片后常規(guī)二甲苯脫蠟，遞減梯度酒精（無(wú)水乙醇、95%酒精、80%酒精I(xiàn)、II）各3min脫蠟至水。（2）新鮮配制3%H202，于室溫下避光浸泡10min,以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶。
6、（3）PBS液洗3次，每次5min。（4）檸檬酸緩沖液浸泡，微波修復(fù)（高火加熱至沸騰后，降至低火，加熱共20min后，自然冷卻至室溫）。（5）PBS液洗3次，每次2min。（6）滴加通用型的正常山羊血清工作液室溫下與濕盒中封閉10mino（7）PBS液洗3次，每次5min。(8)滴加一抗：A兔抗人VEGFR-3多克隆抗體：購(gòu)自上海普林斯頓生物科技發(fā)展有限公司(1:100)。置于濕盒中4°C過(guò)夜，B兔抗人TFPI-2多克隆抗體：購(gòu)自北京義翹神州生物技術(shù)有限公司(1:200)，置于冰箱中4°C過(guò)夜。
7、(9)PBS液洗3次，每次5min。(10)每張切片滴加1滴(約50uL)二抗(1%BSA-PBS)，37°C下孵育20min。(11)應(yīng)用DAB溶液顯色，鏡下控制染色時(shí)間。(12)自來(lái)水充分沖洗，蘇木素復(fù)染。(13)梯度酒精脫水。(14)二甲苯透明、中性樹(shù)膠封片。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包，根據(jù)資料類(lèi)型分別采用字2檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)、方差分析及Spearman等級(jí)相關(guān)分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。以P[7]SteinerFA,HongJA,FischetteMR，etal.Sequenti
8、al5-Aza2’-deoxycytidine/depsipeptideFK228treatmentinducestissuefactorpathwayinhibitor2(TFPI-2)expressionincancercells[J].Oncogene,2013,24(13):2386-2397.[8]MiyagiY，KoshikawaN,YasumitsuH,etal.cDNAcloningandmRNAexpressionofaserineproteinaseinhibitorsecr
