葉綠素的定量測定及葉綠素?zé)晒鈨x分析

《葉綠素的定量測定及葉綠素?zé)晒鈨x分析》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。

1、葉綠素的定量測定及葉綠素?zé)晒鈨x分析實(shí)驗(yàn)原理葉綠素的定量測定：葉綠素a、b在紅光區(qū)的最人吸收峰分別位于663nm與645nm，乂，根裾光密度的加和性我們可以在這兩個(gè)波長的光T分別測葉綠素提取液的消光度并根裾其不同情況的比吸收系數(shù)來計(jì)算葉綠素a、b各自的含S。另外，由于葉綠素a、b在652nm波長光照下有相同比吸收系數(shù)34.5,故可測出總?cè)~綠素含量。葉綠素?zé)晒鈨x參數(shù)分析：接受了1個(gè)光子的激發(fā)態(tài)的葉綠素有三種途徑來回到基態(tài)，分別為熒光、光化學(xué)反應(yīng)和熱。因此測量葉綠素?zé)晒鈩?dòng)力參數(shù)對以反映棺物光合作用的狀態(tài)（光能的吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)及分K等）。葉綠素?zé)晒鈨x可分為連續(xù)

2、激發(fā)式與脈沖調(diào)制式，木次試驗(yàn)用的足脈沖調(diào)制式，冇便攜的特點(diǎn)。已知梢物熒光多來自PSII滅線色索蛋白合體中的葉綠索a，熒光發(fā)射波長范圍約在650-780nm，發(fā)射峰在685nm與735nm。當(dāng)楨物經(jīng)過暗適應(yīng)后，所有的PSII都處于完全打開狀態(tài)，即其不游PQ等都處于氧化狀態(tài)，PSII系統(tǒng)可以接受電子。此吋經(jīng)過激發(fā)光照射后所發(fā)射的熒光足固定熒光F。。之后川飽和脈沖技術(shù)，即川一個(gè)持續(xù)吋間很短的強(qiáng)光關(guān)閉所有光合作用電子門使PSII的光化學(xué)作用暫時(shí)無法進(jìn)行，再測M熒光，可得敁大值Fm（此時(shí)光合作用能fi全部轉(zhuǎn)化為災(zāi)光和熱）。Fv為可變?yōu)墓猓瑸镕m與F。之差，反

3、應(yīng)了QA的還原情況。實(shí)驗(yàn)儀器及材料脈沖調(diào)制式葉綠素?zé)晒鈨x，分光光度計(jì)，研缽，漏斗，分析天平。菠菜葉，80%丙酮，碳酸鈣，石英砂，不同環(huán)境下的煙草。實(shí)驗(yàn)步驟1.葉綠素定量測定1.稱取新鮮菠菜葉片5g剪碎置于研缽中，加入適M碳酸鈣與石英砂和適M?丙酮，勻漿,繼續(xù)加入適S內(nèi)酮碾磨充分，用內(nèi)酮過濾于帶刻度試管內(nèi)，定容至25ml，搖勻。2.以80%丙酮為參比液，分別在645nm、663nm與652nm波長光照射下測景吸光度。3.處理數(shù)據(jù)。2.葉綠素?zé)晒鈨x參數(shù)分析1.選取一盆從溫室移至室內(nèi)條件下的煙草植株與一盆室內(nèi)條件（逆境）處理的煙草植株，分別在相似位置夾上

4、葉八夾了，暗適應(yīng)20min。2.用葉綠素?zé)晒鈨x在Fv/Fm檔測量葉片熒光參數(shù)。3.數(shù)據(jù)分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.原始數(shù)據(jù)記錄1.葉綠素定量測定表1.稀釋1倍后的提取液0D值測量波長（nm）645663652OD0.4081.0070.582表2.稀釋2倍后提取液0D值測量波長（nm）645663652OD0.1900.4380.2512.葉綠索熒光儀參數(shù)分析表3.熒光參數(shù)第一組參數(shù)FoFmFv/mFv/o正常23912490.8084.225脅迫2789660.7122.474表4.熒光參數(shù)第二組（同組人測量）參數(shù)FoFmFv/mFv/o正常3161550

5、0.7963.905脅迫31711710.7292.6941.數(shù)據(jù)處理及分析1.葉綠素定量測定由于稀釋一倍吋奮測暈數(shù)據(jù)超出景程，故改為稀釋兩倍。已知葉綠素a、b80%丙酮溶液最大吸收峰迕663nm下分別為82.04與9.27,645nm下分別為16.75與45.6,可列出關(guān)系式:D663=82.04Ca+9.27bDe4S=16.75Ca+45.6b代入稀釋兩倍P的數(shù)裾，解得Ca'=5.08mg/l,Cb'=2.31mg/l故原提取液閃Ca=20.32mg/l,Cb=9.24mg/l。葉綠素總量為CT=29.56mg/l。若川OD652求葉綠素總含

6、景：_D652*1000由稀釋一倍的數(shù)據(jù)得源提取液葉綠素總濃度CT1=33.7mg/l由稀釋兩倍的數(shù)據(jù)得源提取液葉綠素總濃度CT2=29.1mg/l由CT、CT1和CT2算出的葉綠素含量分別為1.478mg/g、1.685mg/g、1.455mg/g。1.葉綠素?zé)晒鈨x參數(shù)分析Fo：在第一組數(shù)椐中，F(xiàn)OlE?！登也钪禐?9.而第二組數(shù)據(jù)中「（，權(quán)與卩…隧相差不大，有Fo^—F0^=loF。為基礎(chǔ)熒光，足在所奮PSII都處于打開狀態(tài)吋，即都可以發(fā)生光反應(yīng)吋，收到適3激發(fā)光后發(fā)出的熒光。是一?個(gè)與葉綠素濃度有關(guān)的基礎(chǔ)量。因此可能與是否受短期脅迫關(guān)系不大，

7、而與葉什木身生長狀態(tài)有關(guān)。Fm：受脅迫的Fm值明兄小于不受脅迫的Fm值。Fmira-FmlM=283,Fm2正^Fm2M=379。FFm為所有PSII關(guān)閉時(shí)所測熒光，即此情況卜PSII將本來要轉(zhuǎn)化為傳遞電子的能M都作為熒光與熱散發(fā)出。因此Fm可川來人致表示葉片接收的光能。Fv>Fv/m,Fv/0：Fv=Fm-F0,表示可變熒光，是在排除了同定熒光后所剩的光能，即可能用于光化學(xué)反應(yīng)的最人能量。匕可以反映葉綠素的活忡。由數(shù)裾知脅迫條件下Fv明顯減小，可知在脅迫狀態(tài)屮光合作用系統(tǒng)受阻。Fv/m是PSII最大光化學(xué)量子產(chǎn)量，可反映PSII反應(yīng)中心的敁大光能

8、轉(zhuǎn)挽效率。分析數(shù)據(jù)知Fv/mn都稍稍大于Fv/m?，即正常椬株的PSII最大仙光能轉(zhuǎn)換率稍大于受脅逍楨株。Fv/Q可表示P