不同免疫增強(qiáng)劑對蛋雞新城疫疫苗免疫效果影響試驗(yàn)

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1、不同免疫增強(qiáng)劑對蛋雞新城疫疫苗免疫效果影響試驗(yàn)（哈爾濱中科生物工程有限公司趙前）免疫調(diào)節(jié)劑是用于調(diào)節(jié)和控制免疫功能的藥物，包括免疫抑制劑和免疫增強(qiáng)劑。免疫增強(qiáng)劑是一類單獨(dú)使用或與抗原同時(shí)使用、通過非特異性途徑增強(qiáng)機(jī)體免疫應(yīng)答的物質(zhì)，可增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，緩解由環(huán)境造成的免疫功能紊亂，有利于預(yù)防和治療傳染性和條件性疾病。目前在臨床上常用的免疫增強(qiáng)劑有黃芪多糖、卡介苗、鹽酸左旋咪唑、香菇多糖、VC、VE、硒、白細(xì)胞介素-2（白介素-2）等。本試驗(yàn)選用黃芪多糖粉劑、鹽酸左旋咪唑、VE、VC作為免疫增強(qiáng)劑，以探明不同免疫增強(qiáng)劑對蛋雞新城疫免疫效果的影響。1材

2、料與方法1.1試驗(yàn)動(dòng)物1日齡健康海蘭褐蛋雞，購于泰安東岳種禽有限公司。1.2試驗(yàn)材料96孔V型微量反應(yīng)板、移液器、生理鹽水、1%雞紅細(xì)胞懸液。新城疫血凝抑制試驗(yàn)抗原由中國科學(xué)院提供；雞新城疫滅活疫苗（LaSota株）購于乾元浩生物股份有限公司。黃芪多糖粉劑、鹽酸左旋咪唑、VE、VC由ACV健康養(yǎng)殖工程中心提供。RPMI1640培養(yǎng)液（Gibco公司）；CKK-8、刀豆蛋白A（ConA，Sigma公司）。小牛血清、Hank′s液、臺酚蘭、肝素鈉。1.3試驗(yàn)動(dòng)物的處理600只健康海蘭褐蛋雞隨機(jī)分為A、B、C、D、E5組，每組120只。試驗(yàn)在相同的環(huán)境下，

3、采用同種飼料進(jìn)行飼喂和同一防疫程序進(jìn)行免疫預(yù)防。50日齡防疫新城疫Ⅳ系和新城疫滅活疫苗時(shí)，免疫增強(qiáng)劑在防疫前后（48~52日齡）連用5d。A組使用預(yù)防量的黃芪多糖粉劑，B組鹽酸左旋咪唑10mg/kg拌料，每天早晚各一次，C組VE80mg/kg拌料，D組VC100mg/kg拌料，E組不加免疫增強(qiáng)劑，作為對照組。1.4抗體水平檢測分別于免疫前1d和免后第7、14、21、28、35、42天，每組隨機(jī)抽樣15只雞翅靜脈采血，分離血清，采用血凝（HA）與血凝抑制試驗(yàn)（HI）（《高致病性禽流感診斷技術(shù)》中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T18936-2003）檢測抗體

4、效價(jià)，計(jì)算每組平均值，結(jié)果以log2表示。1.5ConA誘導(dǎo)的雞血液T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)分別于免疫前1d和免后第7、14、21、28、35、42天，每組隨機(jī)抽取15只雞翅靜脈采取抗凝血，將1.5mL抗凝血與1.5mL細(xì)胞培養(yǎng)液（1640，不含胎牛血清）混勻；在滅菌離心管中加入3mL淋巴細(xì)胞分離液，并將3mL混勻血液輕輕的平鋪在淋巴細(xì)胞分離液表面，1500r/min離心20min；將離心分層的淋巴細(xì)胞吸出，轉(zhuǎn)到1.5mL離心管中，加入細(xì)胞培養(yǎng)液（1640，不含胎牛血清）重懸，3000r/min洗滌兩次；將淋巴細(xì)胞懸浮于1640細(xì)胞培養(yǎng)液中，用臺酚蘭染色計(jì)

5、數(shù)活細(xì)胞數(shù)（應(yīng)在95%以上），調(diào)整細(xì)胞濃度為1×107個(gè)/mL。將調(diào)整好的細(xì)胞懸液加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔加99μL，然后實(shí)驗(yàn)組加入1μLConA（終濃度為10μg/mL），對照組加入1μL細(xì)胞培養(yǎng)液（1640，含胎牛血清），空白對照加入100μL細(xì)胞培養(yǎng)液（1640，含胎牛血清）。每個(gè)樣品作兩個(gè)平行。將鋪好的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板放入5%CO2，37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h；每孔加入終濃度10μLCCK-8，放入二氧化碳培養(yǎng)箱，孵育1h后用酶標(biāo)儀（OD450）讀數(shù)，并計(jì)算刺激值。2結(jié)果2.1不同免疫增強(qiáng)劑對新城疫抗體水平的影響不同日齡雛雞新城疫（ND）抗體

6、水平結(jié)果見圖1。圖1不同日齡雛雞新城疫抗體水平結(jié)果（log2）由圖1可知，試驗(yàn)A、B、C、D組對ND體液免疫水平的提高均有一定的效果。從70日齡前抗體提升的速度及達(dá)到的峰值水平上來看，A組、B組、D組更具有優(yōu)勢，且A組整體抗體水平消減曲線走勢較好。由于各試驗(yàn)組ND基礎(chǔ)抗體水平不同，所以對免疫后抗體滴度增加值進(jìn)行了比較。由圖2可以清楚看出，各組免疫增強(qiáng)劑對ND體液免疫都有一定的作用，免疫后1周內(nèi)效果比較明顯，A、B、D組與E組差異顯著（P<0.05），免后14dD組與E組差異顯著（P<0.05），免后21、28、35d各組差異不顯著（P>0.05）。圖

7、2免疫后不同日齡抗體水平與免疫前抗體水平的差值比較2.2不同免疫增強(qiáng)劑對新城疫疫苗T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響不同免疫增強(qiáng)劑對新城疫疫苗T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響見圖3，由圖3可以看出試驗(yàn)A、B、C、D、E組與對照組相比，均具有提高T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力和提高細(xì)胞免疫的作用，從免后21日齡前，A、B、D組效果更明顯，B組ND細(xì)胞免疫水平最好。圖3不同免疫增強(qiáng)劑對雞T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響3討論體液免疫是機(jī)體抵抗傳染病的主要因素之一，抗體是介導(dǎo)體液免疫的重要分子，抗體效價(jià)的高低直接反映機(jī)體的體液免疫狀態(tài)。免疫增強(qiáng)劑能夠促進(jìn)抗體的產(chǎn)生，延緩抗體的下降或消失。由試驗(yàn)可知，

8、黃芪多糖粉劑、鹽酸左旋咪唑、VE、VC均能有效促進(jìn)雞新城疫抗體的產(chǎn)生，提高機(jī)體免疫水平。其中，黃芪多糖粉劑、