大鼠胰腺發(fā)育不同階段肝細(xì)胞生長(zhǎng)的論文

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1、大鼠胰腺發(fā)育不同階段肝細(xì)胞生長(zhǎng)的論文作者：程梅吳玉龍賀秀香徐仁華孫麗紅【摘要】目的研究肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體編碼基因cmet在大鼠胰腺發(fā)育不同階段的表達(dá)。方法采用高密度寡核苷酸芯片對(duì)孕12.5d（e12.5）、孕15.5d和孕18.5d、新生、成年胰腺進(jìn)行基因轉(zhuǎn)錄水平分析，并用rtpcr技術(shù)驗(yàn)證基因在大鼠胰腺不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)。結(jié)果cmet基因在e15.5、e18.5較成年特異性高表達(dá)。經(jīng)rtpcr驗(yàn)證，cmet基因表達(dá)趨勢(shì)與芯片結(jié)果相符；與芯片cmet探針?biāo)靡锊煌瑀tpcr，結(jié)果卻在各發(fā)育階段

2、呈現(xiàn)與芯片不同的表達(dá)趨勢(shì)。結(jié)論提示cmet可能在胰腺發(fā)育過(guò)程中起到調(diào)控作用，參與胚胎胰腺發(fā)育中晚期細(xì)胞功能完善的信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程。并且cmet在胰腺發(fā)育中發(fā)揮作用有可能存在不同轉(zhuǎn)錄本。【關(guān)鍵詞】肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體編碼基因cmet胰腺生長(zhǎng)發(fā)育高通量寡核苷酸芯片rtpcr【abstract】objectivetoinvestigatethefunctionofcmetinthedifferentdevelopmentstagesofratpancreas.methodsusinggenechipexpres

3、sionset230atodetectthesignalvalueofdifferentdevelopmentstagesofratpancreas:e12.5，e15.5，e18.5，neet.resultscmetexpresshighlyatratembryonicday15.5，18.5.thecmetexpressiontrendencyofgenechipsisconsistenterofrtpcrofhaveanotherresult.conclusioncmetprotooncoge

4、nemayplaysaroleinthefunctionmaturationstagesofratpancreaticdevelopment.theremaybedifferenttranscriptionsofcmetintheprogressionofratpancreaticmaturation.【keyet，pancreaticdevelopment，genechips，rtpcr胰腺發(fā)育是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，胰島結(jié)構(gòu)的形成和生物學(xué)功能發(fā)揮是一個(gè)重要環(huán)節(jié)。.大鼠胚胎胰腺發(fā)育分為三個(gè)階段：①12.5d胰

5、腺由胰腺上皮和間充質(zhì)細(xì)胞組成；②胚胎15.5d左右由胰腺上皮細(xì)胞分化而來(lái)的內(nèi)分泌細(xì)胞開(kāi)始突破基底膜向間充質(zhì)遷移并逐漸相互聚集黏附；③胚胎18.5d左右基本形成了典型的胰島結(jié)構(gòu)［１］。完整的胰島結(jié)構(gòu)是胰腺發(fā)揮正常生物學(xué)功能的基礎(chǔ)，了解完整胰島結(jié)構(gòu)的形成過(guò)程及功能完善調(diào)控機(jī)制對(duì)糖尿病發(fā)病機(jī)制及治療的研究有著重要的基礎(chǔ)理論和應(yīng)用價(jià)值。目前，盡管對(duì)胰腺胚胎發(fā)育的研究在形態(tài)學(xué)上已明確，但分子網(wǎng)絡(luò)調(diào)控機(jī)制上卻尚不明晰［２］。功能學(xué)研究已經(jīng)證實(shí)在胰腺的整個(gè)發(fā)育過(guò)程中信號(hào)通路和轉(zhuǎn)錄因子起著非常重要的作用，如fgf,hedge

6、hog,notch，tgfβ/activin等信號(hào)通路以及nf1(tcf1),hnf1β(tcf1β),hnf4(tcf4),pdx1,neurod1,ngn3,pax4,pax6等轉(zhuǎn)錄因子［３，４］。胰島結(jié)構(gòu)形成是一個(gè)受細(xì)胞黏附及遷移等多因子調(diào)控的過(guò)程［5，6］。本文以sd大鼠為模型，選取e15.5d、e18.5d及新生這三個(gè)大鼠胰腺發(fā)育和細(xì)胞功能完善的關(guān)鍵時(shí)期，通過(guò)affymetrix高通量多聚寡核苷酸芯片及rtpcr技術(shù)對(duì)cmet基因在胰腺發(fā)育不同階段的表達(dá)做出初步分析。為揭示cmet基

7、因在胰腺發(fā)育細(xì)胞功能完善過(guò)程中的作用提供了一定依據(jù)。1材料與方法1.1材料成年sd大鼠60只，雌20只，雄40只，體質(zhì)量250g左右，由南京醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心提供。genechipmurinegenomerae230a芯片(affymetrix公司)。mastercyclerpcr儀(eppendorf公司),trizolreagent(美國(guó)gibco公司),rnaeasyminikit(qiagen),rtpcr試劑盒(tayobo)。1.2方法1.2.1組織取材：于6:00時(shí)，將雌雄以1∶2合籠，次日檢測(cè)

8、有陰栓者，定為受精0.5d(e0.5)，取e12.5，e15.5和e18.5胚胎胰腺以及新生鼠胰腺；取懷有胚胎e12.5、e15.5和e18.5的母鼠，引頸處死，分離出胚胎，顯微解剖鏡下用顯微鑷子取出胰腺后，迅速在液氮中冷凍。新生和成年鼠直接分離出胰腺［7］。1.2.2胰腺發(fā)育各階段芯片制備：用trizolmreagent提取大鼠e12.5、e15.5、e18.5、新生和成年胰腺總rna，利用rna