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《shrna干擾胃泌素基因表達對人胃癌細胞bgc823增殖和遷移能力的抑制作用的論文》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、shRNA干擾胃泌素基因表達對人胃癌細胞BGC823增殖和遷移能力的抑制作用的論文【摘要】目的構建針對人胃泌素基因的shrna干擾表達載體，觀察胃泌素基因表達抑制對人胃癌細胞系bgc823細胞增殖和遷移能力的影響。方法根據人胃泌素序列設計并構建3個靶向人胃泌素基因的shrna真核表達載體，以脂質體轉染的方法將胃泌素干擾質粒轉染至人胃癌細胞系bgc823,經g418篩選出穩(wěn)定轉染的陽性細胞。通過rt-pcr技術篩選出表達抑制最強的穩(wěn)定轉染胃癌細胞系。應用流式細胞儀技術檢測其細胞周期變化情況。采用tr
2、ans-igration ofhumangastriccancercellbgc823 liuyan1,gengpaili1,lüyouyong2 (1.qinghaiuniversitymedicalcollege; 2.pekinguniversityschoolofoncology，laboratoryofmolecularbiology) abstractobjectivetoconstructshrnaexpressionvectortargethumangastringene
3、andtoinvestigatetheeffectofshorthairpinrna(shrna)targetingonthecellcycleofgastriccancerbgc-823cells.methodsshrnaexpressingvectorstargetingtohumangastrinrnalevelofgastrinexpressionigrationcapabilityofstablytransfectedcellsinvitrobermodel.fcmedtodetectt
4、hecellcycle.resultstherebinantplasmidvectorrnaexpressioninbgc-823cells.bgc823cellsembranecellnumberdecreasedsignificantly.conclusionknockdoigrationcapability. keyigrationproliferation 胃泌素(gastrin)是胃竇部和十二指腸的g細胞分泌的一種多肽類激素，在食物消化過程中發(fā)揮重要作用。.它是刺激胃酸分泌的最重要的
5、激素，而且對胃腸道粘膜細胞有重要的營養(yǎng)作用。而在近20年的研究中，胃泌素作為單純消化道激素的概念發(fā)生了巨大變化。研究發(fā)現(xiàn)胃泌素與其相應受體結合后以自分泌方式對消化道腫瘤細胞的增殖、凋亡及浸潤轉移等生物學過程進行重要調控。而今，研究者更傾向于認為對正常消化道上皮細胞和腫瘤細胞的自分泌調控作用是消化道胃泌素的最重要功能,胃泌素已成為一類重要的腫瘤自分泌生長因子[1-3]。明晰胃泌素調控作用機制在闡明消化道腫瘤的發(fā)病機制，探索有效的內分泌治療途徑方面具有十分重要的意義?！ na干擾(rnainterf
6、erence,rnai)是近年來發(fā)現(xiàn)的一種序列特異的轉錄后基因沉默現(xiàn)象，是機體用來抵抗病毒入侵和抑制轉座子活動的自然機制[4，5]。細胞內雙鏈rna在酶的作用下，形成20～25個堿基大小的小干擾rna(smallinterferingrna)，小干擾rna結合多組分核酸酶并使其激活，從而精確降解與序列相同的mrna，抑制該基因在細胞內的翻譯表達。小干擾rna是研究未知基因功能的有力工具。近年來應用sirna特異性地抑制病毒體內和體外復制的研究取得了令人矚目的成果，為sirna作為基因治療藥物的發(fā)展
7、起到了推進作用[6]。 本實驗擬構建針對人gastrinmrna的shrna(shorthairpinrnas,shrna)真核表達載體，以脂質體轉染人胃癌細胞系bgc823并篩選出穩(wěn)定轉染的細胞，觀察其對胃癌細胞遷移和增殖能力的影響，從而為胃癌治療的分子靶點篩選提供實驗室基礎依據?！ ?材料與方法 1.1材料 胃癌細胞bgc-823(北京腫瘤防治研究所分子生物學實驗室);載體psilencertm3.1(ambion公司);t4dna連接酶、bamhⅰ酶、hindⅲ酶(promega公司)
8、;g418(濃度為400μg/ml，gibco-brl公司產品);cdna第一鏈合成試劑盒、rt-pcr試劑盒(北京全式金公司);trizolreagent(gibco-invitrogen公司);lipofectamim2000(invitrogen公司);transem養(yǎng)基和10%胎牛血清(gibco公司)?！ ?.2方法 1.2.1shrna設計和合成：根據gastrin基因序列(nm_000805)、shrna設計規(guī)則及blast同源搜索選取、設計三對引物,每一對引物上游
