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1、中圖分類號(hào)：Q946單位代碼：10425學(xué)號(hào)：Z12030243產(chǎn)油微藻油體的積累、分離與表征TheEnrichment,IsolationandCharacterizationofLipidDropletsfromOleaginousMicroalgae工程領(lǐng)域：生物工程研究方向：生物能源工程作者姓名：邴欣校內(nèi)導(dǎo)師：于道永副教授現(xiàn)場(chǎng)導(dǎo)師：楊孟龍教授級(jí)高工二〇一五年六月TheEnrichment,IsolationandCharacterizationofLipidDropletsfromOleaginousMicroalg
2、aeAThesisSubmittedfortheDegreeofMasterofBiologicalEngineeringCandidate:XinBingSupervisor:AssociateProfessorDaoyongYuProfessorMenglongYangCollegeofChemicalEngineeringChinaUniversityofPetroleum(EastChina)關(guān)于學(xué)位論文的獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的論文是本人在指導(dǎo)教師指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果，論文中有關(guān)資料和數(shù)據(jù)是實(shí)
3、事求是的。盡我所知，除文中已經(jīng)加以標(biāo)注和致謝外，本論文不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，也不包含本人或他人為獲得中國(guó)石油大學(xué)（華東）或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或?qū)W歷證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作出了明確的說明。若有不實(shí)之處，本人愿意承擔(dān)相關(guān)法律責(zé)任。學(xué)位論文作者簽名：____________日期：年月日學(xué)位論文使用授權(quán)書本人完全同意中國(guó)石油大學(xué)（華東）有權(quán)使用本學(xué)位論文（包括但不限于其印刷版和電子版），使用方式包括但不限于：保留學(xué)位論文，按規(guī)定向國(guó)家有關(guān)部門（機(jī)構(gòu)）送交學(xué)位論文，以學(xué)術(shù)
4、交流為目的贈(zèng)送和交換學(xué)位論文，允許學(xué)位論文被查閱、借閱和復(fù)印，將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行檢索，采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存學(xué)位論文。保密學(xué)位論文在解密后的使用授權(quán)同上。學(xué)位論文作者簽名：____________日期：年月日指導(dǎo)教師簽名：________________日期：年月日摘要產(chǎn)油微藻是生產(chǎn)生物柴油的重要原料，為了提高微藻細(xì)胞的含油量，需要對(duì)微藻的油脂積累和代謝途徑進(jìn)行探索。油體是細(xì)胞內(nèi)油脂儲(chǔ)存和代謝的重要細(xì)胞器，對(duì)它進(jìn)行深入研究對(duì)提高細(xì)胞內(nèi)油脂積累等具有重要意義。本課題以布朗葡萄藻、亞心形扁藻為研
5、究對(duì)象，分別探索了基于尼羅紅染色的油脂含量測(cè)定方法和油體積累方法。隨后，對(duì)油體的分離方法進(jìn)行探索。最后對(duì)分離的油體進(jìn)行粒徑大小、油脂成分、蛋白組成等方面的表征。通過探索染色前處理和染色條件，優(yōu)化了葡萄藻的染色方法：藻液搖勻后超聲波處理3min，離心去除培養(yǎng)基，用體積分?jǐn)?shù)8%的DMSO水溶液重懸細(xì)胞，調(diào)整懸液OD750到0.16，每1mL樣品加入10μL120μg/mL左右的尼羅紅溶液，40℃水浴10min，激發(fā)光波長(zhǎng)520nm。隨后用相同的方法探索了亞心形扁藻的油脂測(cè)定條件，并確定關(guān)鍵參數(shù)為：DMSO體積分?jǐn)?shù)4%、尼羅紅濃度
6、大于0.7μg/mL、細(xì)胞濃度OD750=0.3。通過探索，本課題建立了針對(duì)上述兩種微藻細(xì)胞的油脂測(cè)定方法，實(shí)現(xiàn)了準(zhǔn)確、快速地對(duì)這兩種微藻進(jìn)行油脂含量的測(cè)定。通過改進(jìn)培養(yǎng)裝置、篩選培養(yǎng)基等方法提高了兩種微藻的生物量，并通過高強(qiáng)度光照提高了細(xì)胞內(nèi)油脂含量，為油體分離實(shí)驗(yàn)提供了足夠的原材料。隨后，分別對(duì)兩種微藻細(xì)胞內(nèi)油體的分離方法進(jìn)行探索，通過探索細(xì)胞破碎條件、破碎液除雜條件、蔗糖梯度離心條件、純化條件等，成功從兩種微藻中分離到完整的油體。隨后對(duì)油體進(jìn)行了初步表征，結(jié)果表明：（1）布朗葡萄藻中油體粒徑約為1.1μm，亞心形扁藻油
7、體粒徑約為0.6μm；（2）兩種藻細(xì)胞油體中的油脂都以甘油三酯為主，布朗葡萄藻油體中可能還有甘油二酯和固醇酯；（3）兩種微藻油體中沒有鑒定出與高等植物有同源性的油體特異性蛋白。在課題最后，通過雙向電泳技術(shù)基本實(shí)現(xiàn)了對(duì)油體蛋白的進(jìn)一步分離，這為后序微藻油體上新蛋白的鑒定奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：產(chǎn)油微藻，油體，分離，表征iTheEnrichment,IsolationandCharacterizationofLipidDropletsfromOleaginousMicroalgaeXinBing(Bioengineering)Dir
8、ectedbyAssociateProfessorDaoyongYuAbstractOleaginousmicroalgaeisimportantfeedstockforbiodieselproduction.Researcheffortsthatexploremechanismsofli
