熊果酸和齊墩果酸對胰脂肪酶活性及構(gòu)象的影響論文

ID:10470052

大?。?4.50 KB

頁數(shù):4頁

時間:2018-07-06

熊果酸和齊墩果酸對胰脂肪酶活性及構(gòu)象的影響論文_第1頁
熊果酸和齊墩果酸對胰脂肪酶活性及構(gòu)象的影響論文_第2頁
熊果酸和齊墩果酸對胰脂肪酶活性及構(gòu)象的影響論文_第3頁
熊果酸和齊墩果酸對胰脂肪酶活性及構(gòu)象的影響論文_第4頁
資源描述:

《熊果酸和齊墩果酸對胰脂肪酶活性及構(gòu)象的影響論文》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、熊果酸和齊墩果酸對胰脂肪酶活性及構(gòu)象的影響論文劉志芳,田萌,馬躍文,李政,李黎,劉克武【摘要】目的研究熊果酸(UA)和齊墩果酸(OA)對胰脂肪酶(LPS)活性和構(gòu)象的影響。方法采用紫外光譜法、熒光光譜法以及圓二色譜法分析UA和OA作用后LPS相應(yīng)圖譜的特征。結(jié)果UA和OA作用后LPS的活性明顯降低,紫外吸收光譜發(fā)生改變。熒光淬滅結(jié)果顯示UA作用后,LPS的熒光發(fā)生淬滅.freela公司;其余試劑均為國產(chǎn)分析純。2方法2.1UA,OA對LPS活性的影響2.1.1UA,OA對LPS的抑制作用酶活性測定采用銅皂法[5]。2.1.2UA,OA對L

2、PS的抑制動力學(xué)研究在酶的反應(yīng)體系中分別加入不同濃度的UA和OA,改變底物橄欖油的濃度,測定酶促反應(yīng)的初速度。以Linel濃度為1×10-5mol/L的LPS溶液,分別加入不同微量體積的UA和OA(1.0×10-3mol/L)溶液,使三萜類小分子與LPS的終摩爾比分別為0/1,0.2/1,0.4/1,0.6/1,0.8/1,1/1,3/1,5/1。混合均勻后,室溫放置10min,以相同濃度的小分子溶液作空白,記錄200~300nm的紫外吸收光譜。以295nm為激發(fā)波長,室溫下測定300~400nm的熒光光譜,溶液濃度及反應(yīng)條件同上述。2.

3、2.2圓二色(CD)譜測定樣品池光程為0.1cm,在室溫下測定波長范圍190~250nm的CD譜。CD譜用平均殘基摩爾橢圓度表示,單位為deg·cm2·mol-1,數(shù)據(jù)經(jīng)3次掃描取平均值。得出CD譜后,用該儀器附帶的楊氏方法軟件計算脂肪酶的二級結(jié)構(gòu)含量。LPS濃度為1×10-5mol/L,實驗時三萜類小分子與LPS的終摩爾比為0/1,0.4/1,3/1。3結(jié)果與討論3.1UA,OA對LPS活性的影響不同濃度的UA,OA對LPS活力的影響結(jié)果見圖1。由圖1可以看出,UA,OA對LPS都有一定的抑制作用,抑制作用隨UA,OA濃度的升高而增強(qiáng)。

4、在相同濃度下,UA的抑制作用大于OA。3.2UA,OA對LPS的抑制動力學(xué)UA,OA對LPS的抑制作用如圖2。由圖可知隨著UA,OA濃度的升高,酶的Km值保持不變,而Vmax則隨UA,OA濃度的升高而不斷降低。因此UA、OA對LPS均屬于非競爭性抑制。采用Dixon作圖法,以1/V對不同濃度的UA,OA作圖,可得到UA,OA的抑制常數(shù)Ki。UA,OA的Ki分別為0.6mmol/L,0.46mmol/L,可見抑制作用UA大于OA。3.3不同濃度UA,OA對LPS的紫外吸收差譜大多數(shù)蛋白質(zhì)分子在280nm附近有一個吸收峰,是由于色氨酸(Trp

5、)和酪氨酸(Tyr)等芳雜環(huán)對光的吸收;同時在220nm左右有一個由肽鍵的C=O的π-π躍遷引起的強(qiáng)吸收峰,與蛋白質(zhì)的α-螺旋含量有關(guān)[7]。用不同濃度的UA,OA作用于LPS的紫外吸收差譜如圖3??芍狶PS在270nm和220nm附近出現(xiàn)最大吸收峰,且隨UA、OA濃度的增加LPS在220nm和270nm附近的吸收不斷增大,圖3A中最大吸收都有少許紅移。在低濃度時,酶在220nm和270nm附近的吸收隨濃度的增加而急劇增加,當(dāng)UA與酶的比例達(dá)到1/1后,紫外吸收增幅減慢。因此可以認(rèn)為UA與LPS的摩爾比例為1/1時,具有最大紫外吸收。圖3

6、B中OA作用后的LPS最大吸收峰發(fā)生紅移,當(dāng)OA與酶的比例達(dá)到3/1后,紫外吸收增幅明顯減慢。因此可以認(rèn)為OA與LPS的摩爾比例為3/1時,具有最大紫外吸收。從由不同濃度的UA、OA作用后LPS的紫外吸收差譜可見,LPS270nm和280nm附近的吸收主要是由于肽鍵C=O基的π-π*躍遷所引起,與蛋白質(zhì)的α-螺旋含量有關(guān)[6]。當(dāng)UA、OA濃度較低時,這些小分子與LPS的結(jié)合有利于酶分子間和分子內(nèi)的團(tuán)聚作用,使包圍在LPS分子內(nèi)部的色氨酸和酪氨酸殘基的芳雜環(huán)疏水基團(tuán)裸露出來,改變了芳香族氨基酸殘基在空間結(jié)構(gòu)中所處的微環(huán)境使蛋白質(zhì)分子的構(gòu)象

7、發(fā)生改變,α螺旋含量減少;當(dāng)小分子濃度進(jìn)一步升高時,UA處理后的LPS分子發(fā)生蛋白質(zhì)肽鏈伸展現(xiàn)象,使酶分子中疏水作用略有增強(qiáng),吸收峰略增加且略有紅移[7],因此在紫外差譜中酶的最大吸收增加明顯減緩,并產(chǎn)生紅移。而OA沒有紅移現(xiàn)象,表明UA與酶的結(jié)合對酶構(gòu)象的影響較OA大。3.4不同濃度UA,OA對LPS的熒光光譜的影響蛋白質(zhì)中芳香氨基酸的熒光特性可用來推測蛋白質(zhì)的溶液構(gòu)象,提供有關(guān)蛋白質(zhì)生色基團(tuán)的結(jié)構(gòu)及所處微觀環(huán)境的信息。蛋白質(zhì)分子中色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)和苯丙氨酸(Phe)具有熒光性質(zhì),此蛋白質(zhì)內(nèi)源熒光可作為探針檢測蛋白質(zhì)構(gòu)

8、象變化。295nm波長光激發(fā)時,蛋白質(zhì)分子中的Trp殘基受到激發(fā),所產(chǎn)生熒光的強(qiáng)度和位置與這些殘基所處的微環(huán)境密切相關(guān)[8]。由圖4可知,295nm激發(fā)時熒光光譜的最大發(fā)射波長是340nm,隨

當(dāng)前文檔最多預(yù)覽五頁,下載文檔查看全文

此文檔下載收益歸作者所有

當(dāng)前文檔最多預(yù)覽五頁,下載文檔查看全文
溫馨提示:
1. 部分包含數(shù)學(xué)公式或PPT動畫的文件,查看預(yù)覽時可能會顯示錯亂或異常,文件下載后無此問題,請放心下載。
2. 本文檔由用戶上傳,版權(quán)歸屬用戶,天天文庫負(fù)責(zé)整理代發(fā)布。如果您對本文檔版權(quán)有爭議請及時聯(lián)系客服。
3. 下載前請仔細(xì)閱讀文檔內(nèi)容,確認(rèn)文檔內(nèi)容符合您的需求后進(jìn)行下載,若出現(xiàn)內(nèi)容與標(biāo)題不符可向本站投訴處理。
4. 下載文檔時可能由于網(wǎng)絡(luò)波動等原因無法下載或下載錯誤,付費完成后未能成功下載的用戶請聯(lián)系客服處理。
关闭