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1、T7噬菌體展示技術(shù)篩選丙型肝炎病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3的相互作用蛋白中華肝臟病雜志2006年8月第l4卷第8期ChinJHepatol,Augl~2006,V0l14,No.8T7噬菌體展示技術(shù)篩選丙型肝炎病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3的相互作用蛋白黃英蔡雪飛何茂銳張君黃愛(ài)龍?561??病毒性肝炎?【擒■】目的用T7噬菌體篩選系統(tǒng)篩選丙型肝炎病毒非結(jié)構(gòu)蛋白(NS)3的相互作用蛋白.方法應(yīng)用T7噬菌體展示技術(shù),以通過(guò)原核表達(dá)的方式得到的丙型肝炎病毒NS3為靶分子,對(duì)噬菌體人肝細(xì)胞cDNA文庫(kù)進(jìn)行篩選,對(duì)篩選到的克隆進(jìn)行DNA序列分析及同源性研究.結(jié)果經(jīng)
2、鑒定得到2個(gè)陽(yáng)性克隆,并確定能與丙型肝炎病毒NS3相互作用的蛋白質(zhì)為serinepeptidaseinhibitor,cladeA,memberl(SERPINA1)和cyclophilin-LC.結(jié)論T7噬菌體篩選系統(tǒng)是篩選相互作用蛋白的一種簡(jiǎn)單,快速和有效的手段,篩選到的相互作用蛋白為進(jìn)一步探討NS3的致病,致癌機(jī)制提供了重要依據(jù).【關(guān)鍵詞】T7噬菌體,肝炎病毒,丙型,病毒非結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)類,相互作用蛋白Screenin~ofprotdnsinteractingwithhepatitisCvirusNS3fromT7-phage
3、disptay~braryHUANGYing,CAIXue'HEMao?九l'ZHANGJun,HUANGAi-long.MolecularBiologyLaboratoryofInfectiousDiseases,InstituteforViralHepafia~ChongqingUniversityofMedicalSciences,Chongqing400010,ChinaCorrespondingauthor:HUANGAi-long,Email:ahuang@public.cta.cq.cn[Abstract]Obje
4、ctiveToscreenandidentifyproteinsthatinteractwithhepatitisCvirusNS3bymeansofTT-phagedisplaysystem.MethodHepatitisCvirusNS3wasexpressedbyprokaryoticexpressionandusedasaselectedmoleculetobiopanthe1-7~lecthumanlivereDNAlibrary;theselectedpositiveclonesworeidentifiedusing
5、DNAsequencingandanalyzedwithBLASTprograminGenBank.ResultAfterBLASTanalysisinallthepositiveclones,theproteinswhichinteractedwiththehepatitisCvirusNS3werefoundtobeserpinpeptidaseinhibitor,cladeA,member1(SERPINA1)andcyclophilin?LC.ConclusionT7-phagedisplaysystemisaconve
6、nient,rapidandeffectivemethodforscreeninginteractingproteins.TheproteinsthusselectedwillprovideanimportantmeansforstudyingthepathogenesisandcarcinogenesisofHCV.[Keywords]T7phage;HepatitisCvirus;Viralnonstructuralproteins;Interactingproteins丙型肝炎病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3(HCVNS3)是一種多功能蛋
7、白,其氨基端具有蛋白酶活性,羧基端具有螺旋酶和(或)三磷酸核苷酶活性,在HCV多聚蛋白的成熟和病毒復(fù)制過(guò)程中發(fā)揮重要作用t-.T7噬菌體展示技術(shù)一直被認(rèn)為是從cDNA文庫(kù)中篩選和分離相互作用蛋白的新穎而有效的方法.噬菌體展示和體外篩選的這種方法因其快速和高親和力而具有其他方法不能比擬的優(yōu)點(diǎn).本研究利用此方法成功地分離到兩個(gè)新的能與HCVNS3相互作用的蛋白質(zhì)的基因,并基金項(xiàng)目:國(guó)家自然科學(xué)基金(30500427)作者單位:400010重慶醫(yī)科大學(xué)病毒性肝炎研究所,教育部感染性疾病分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室黃英女,33歲,主治醫(yī)師,醫(yī)學(xué)
8、博士.通訊作者:黃愛(ài)龍,Email:ahuang@public.cta.cq.cn對(duì)獲得的結(jié)果和篩選方法進(jìn)行初步探討.材料與方法1.材料:(1)菌株和質(zhì)粒:pGEM—Teasy(美國(guó)Promega公司),pQE30原核表達(dá)載體,受體菌BLT5615(德國(guó)Nova
