葛根素在新生鼠缺氧缺血性腦損傷中的神經(jīng)保護(hù)作用論文

《葛根素在新生鼠缺氧缺血性腦損傷中的神經(jīng)保護(hù)作用論文》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。

1、葛根素在新生鼠缺氧缺血性腦損傷中的神經(jīng)保護(hù)作用論文姜泓,王玲,張義和,劉世平,劉廣忠【摘要】目的:建立新生大鼠缺氧缺血腦損傷(HIBD)模型,觀察新生鼠缺氧缺血后腦組織一氧化氮(NO)和NO合成酶(NOS)及神經(jīng)元凋亡的變化及葛根素對(duì)HIBD的保護(hù)作用及機(jī)制.方法:用7日齡SD大鼠制備HIBD模型，治療組在缺氧缺血（HI）后早期腹腔注射葛根素50mg/kg兩次.在HI后不同時(shí)間測(cè)定腦組織勻漿NO和NOS含量以及神經(jīng)元凋亡數(shù)量.結(jié)果:HIBD組在HI后24h腦組織NO，NOS明顯高于對(duì)照組(P0.05)；HI后6h海馬CA1區(qū)凋亡細(xì)胞增多，24h達(dá)高峰；葛根素組24h腦組織NO，NOS較H

2、IBD組相比，顯著下降(P0.05)，同時(shí)海馬CA1區(qū)的凋亡細(xì)胞數(shù)在24h較HIBD組明顯減少(P0.05).結(jié)論:葛根素可通過(guò)抑制NOS的表達(dá)，減少NO的過(guò)量生成.freelg/kg.②缺氧缺血性腦損傷組(HIBD)：于缺氧缺血后即刻、4h腹腔注射等量生理鹽水.③假手術(shù)對(duì)照組：僅作頸部切口，游離右側(cè)頸總動(dòng)脈，但不結(jié)扎，于手術(shù)后即刻、4h腹腔注射等量生理鹽水.1.2.2新生大鼠HIBD模型的建立以5g/L的氯胺酮麻醉，取仰臥位固定于手術(shù)板上.采取頸正中偏右2~3mm切口，游離右側(cè)頸總動(dòng)脈，用50絲線結(jié)扎、縫合切口后，恢復(fù)2h置于2000mL常溫常壓缺氧艙，以1.5L/min的速度輸入含

3、80mL/L氧氣和920mL/L氮?dú)獾幕旌蠚怏w，以測(cè)氧儀監(jiān)控氧的濃度為(80±5)mL/L,2h后取出，返回母鼠身邊繼續(xù)哺乳喂養(yǎng).1.2.3腦組織標(biāo)本的留取于腦缺氧缺血后6h,24h分別麻醉后斷頭取腦并矢狀離斷為左右半球.1.2.4腦組織勻漿的制備及NO,NOS的檢測(cè)取部分右腦組織漂洗、去除血漬、稱重，按1∶9的比例加入冷生理鹽水，在玻璃勻漿管中充分研碎致勻漿化，取100mL/L腦組織勻漿3500r/min離心10min,取上清液檢測(cè)NO,.freelm，依次脫水、浸蠟、包埋，切片厚度約6μm,HE染色，光鏡下觀察確定海馬位置，臨近處的石蠟標(biāo)本連續(xù)切片.切片放入65℃的烤片機(jī)上6h，取出

4、后放入4℃冰箱待用.原位缺口末端標(biāo)記(TUNEL)染色細(xì)胞凋亡檢測(cè)：將組織切片依次脫蠟至水后，進(jìn)行TUNEL染色，觀察400倍光鏡5個(gè)視野下平均陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，具體操作步驟按試劑盒中的說(shuō)明書進(jìn)行（選用蛋白酶K通透處理）.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:數(shù)據(jù)以x±s表示，兩組間比較采用LSDt檢驗(yàn).2結(jié)果2.1NO，NOS的變化HIBD在HI后6h腦勻漿NO,NOS水平開始升高，但與對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；24h腦勻漿NO，NOS水平明顯增高，與對(duì)照組相比差異顯著（P0.05）；而葛根素治療組24h腦勻漿NO，NOS水平顯著低于HIBD，兩組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05,表1）.2.2HE染

5、色和TUNEL染色假手術(shù)組在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)腦組織切片無(wú)明顯缺氧缺血改變.HIBD組6h缺氧缺血側(cè)海馬組織輕度水腫，可見神經(jīng)元腫脹、變性、空泡形成，核固縮，嗜堿性增強(qiáng)，核仁消失，并可見到凋亡小體；24h細(xì)胞凋亡達(dá)高峰，并見許多壞死細(xì)胞，嗜伊紅深染（圖1）.HIBD組各時(shí)間點(diǎn)其缺氧缺血側(cè)細(xì)胞核內(nèi)均可觀察到凋亡細(xì)胞，凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征為胞體縮小，細(xì)胞膜完整，染色質(zhì)凝集，密度增高，呈塊狀或顆粒狀，胞核中有棕色顆粒.HIBD后6h其陽(yáng)性細(xì)胞開始出現(xiàn)，24h最為明顯，呈小片樣分布.凋亡細(xì)胞多位于病變較重的皮質(zhì)的邊緣內(nèi)帶和海馬CA1區(qū)；而假手術(shù)對(duì)照組僅偶見到陽(yáng)性細(xì)胞；葛根素治療組細(xì)胞凋亡的時(shí)程與HIBD組

6、一致，分布極其相似，但海馬CA1區(qū)的凋亡細(xì)胞數(shù)在24h后各時(shí)間點(diǎn)較HIBD組均明顯減少（P0.05，表2）.表1新生大鼠各組腦勻漿NO,NOS水平表2新生大鼠不同時(shí)間點(diǎn)右側(cè)大腦海馬CA1區(qū)凋亡細(xì)胞數(shù)3討論一氧化氮（NO）和內(nèi)皮素（ET）是一對(duì)由血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的血管舒張和收縮因子，其生物活性相互拮抗［1-2］.NO是一種具有自由基性質(zhì)的氣體生物活性分子,大量研究表明，NO在腦缺氧缺血性損傷中具有神經(jīng)保護(hù)和神經(jīng)毒性的雙重作用，生理狀態(tài)下，NOS催化LArg和分子氧生成低水平固有型NO，作為內(nèi)皮源性舒張因子具有舒張血管、抑制血小板聚集、防止血栓形成、拮抗氧自由基的作用；但HIBD后nNOS

7、及iNOS被激活［3］,NO過(guò)度合成則可干擾與生物轉(zhuǎn)化有關(guān)的酶類的活性、破壞DNA結(jié)構(gòu)、抑制線粒體的呼吸功能，具有明顯的神經(jīng)毒性作用［4-5］.葛根素是從中藥葛根中提取的一種異黃酮單體，其化學(xué)名為4，7二羥基8D葡萄糖基異黃酮.既往研究表明其具有多種藥理作用，包括：改善腦微循環(huán)，提高局部血流量，阻止Na+內(nèi)流，具有Na+通道抑制劑的作用［6］；抑制鉀外流［7］；抗氧化［5］；拮抗興奮性氨基酸的神經(jīng)毒性作用，減輕谷氨酸鈉、N