冷凍干燥保存血小板的實(shí)驗(yàn)研究論文

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1、冷凍干燥保存血小板的實(shí)驗(yàn)研究論文劉景漢，周俊，王冬梅，歐陽(yáng)錫林，邢顏超，盧發(fā)強(qiáng)【摘要】本研究探討冷凍干燥保存血小板的方法，以獲得可長(zhǎng)期凍干保存的血小板制品，使之能在常溫條件下保存、占用空間小、重量輕、便于長(zhǎng)距離運(yùn)輸.freelentalStudyonLyophilizationofPlateletsAbstractTheaimofthisstudystorageofhumanplateletsatnormaltemperatureallersizeandlightereetthedemandsinaccidentsande.Humanplateletsetime,the

2、recoveryrateofplatelets,plateletmaximalaggregationinducedbythrombin,coagulationofplatelets,CD62pexpressionandPAC1expressionaximalaggregationinducedbythrombinhadnosignificantdifferencebeta(FPRP),buttheaggregationofplateletsinducedbyADPorpropylgallateFPRP.CD62pexpressionofthelyophilizedpla

3、telets(42.36％)binayenhancetheirsurvivalabilityandprolongatesurvivaltime.Thereforetheefficiencyoflyophilizingplateletscanbeimprovedbasedonthisfreezedryingprocedure.Key,.freela公司產(chǎn)品），百維利肽（Bivalirudin,Medicine公司產(chǎn)品）左旋精氨酸（Larginine,Sigma公司產(chǎn)品），PGE1（商品名保達(dá)新）、海藻糖（trehalose)購(gòu)自南寧中諾生物工程公司）、二甲亞砜（DMSO

4、，天津醫(yī)藥公司產(chǎn)品）。熒光素標(biāo)記的特異性血小板膜表面抗體及相關(guān)多肽：PAC1－FITC，CD62P－PE，CD61－PerCP，MIgGI－PE等購(gòu)自BectonDickinson公司；RGDS肽和GPRP（GlyProArgPro乙酸鹽）購(gòu)自Sigma公司產(chǎn)品。血小板聚集誘導(dǎo)劑包括：凝血酶（thrombin，Sigma公司產(chǎn)品），二磷酸腺苷（ADP，Sigma公司產(chǎn)品），丙基沒(méi)食子酸（Propylgallate，AnalyticalControlSystems公司產(chǎn)品）。MEK6108K型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀（NihonKohden公司產(chǎn)品），APACT2聚集

5、儀（德國(guó)Lanbo公司產(chǎn)品），F(xiàn)ACSCalibur流式細(xì)胞儀（BectonDickinson公司產(chǎn)品）和CellQuest分析軟件，Centrifuge5415D離心機(jī)（Eppendorf），Biofuge15R（Heraeus公司產(chǎn)品），臺(tái)式冷凍干燥機(jī)（TFFD1）。實(shí)驗(yàn)分組實(shí)驗(yàn)為配伍設(shè)計(jì)，5份PCs，各準(zhǔn)備15ml。設(shè)對(duì)照組和2個(gè)實(shí)驗(yàn)組，對(duì)照組為新鮮富含血小板血漿（FPRP），不進(jìn)行任何處理。每份PCs分3個(gè)試管，2ml/tube，分至各組，剩余的離心（2287×g,15分鐘），留取少量血小板血漿（PPP）備用。前處理（海藻糖負(fù)載）血小板中加入預(yù)處理液，實(shí)驗(yàn)組1

6、含海藻糖45mmol/L和DMSO3%，實(shí)驗(yàn)組2含海藻糖45mmol/L，DMSO3%，PGE11μmol/L，LArg5mmol/L，Phy0.5mmol/L和Bivaridin0.5μmol/L。將各組樣品混勻后，37℃水浴4小時(shí)，每20分鐘振搖1次。血小板冷凍干燥、預(yù)水化和再水化血小板懸液1111×g離心8分鐘，用冷凍干燥液1ml（HEPES9.5mmol/L，NaCl142.5mmol/L，KCl4.8mmol/L，MgCl21.0mmol/L，trehalose150.0mmol/L，PGE11μmol/L，LArg5mmol/L，Phy0.5mmol/L，

7、Bivaridin0.5μmol/L，DMSO3%，人血清白蛋白5%）在硅化后的玻璃瓶中重懸血小板，血小板PCT為40%-50%，干燥厚度1cm，進(jìn)行冷凍干燥。冷凍①以5℃/分鐘的速度從22℃降至-5℃；②以2℃/分鐘從-5℃降至-60℃;③-60℃以下維持1小時(shí)以上。干燥一級(jí)干燥，－30℃，1小時(shí)，50mTorr；二級(jí)干燥，架上溫度以0.2℃/分鐘的速度從-30℃升至20℃，50mTorr。一級(jí)干燥和二級(jí)干燥之間采用快速直接升溫，避免梯度升溫。真空干燥完畢后，樣品室溫下在凍干機(jī)中至少放置24小時(shí)，然后用于試驗(yàn)或封裝保存室溫或