多西紫杉醇聯(lián)合順鉑在人骨肉瘤化療中的作用論文

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1、多西紫杉醇聯(lián)合順鉑在人骨肉瘤化療中的作用論文【摘要】［目的］研究多西紫杉醇聯(lián)合順鉑對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞的增殖抑制及在骨肉瘤化療中的作用。［方法］應(yīng)用細(xì)胞計(jì)數(shù)、形態(tài)學(xué)觀察、流式細(xì)胞術(shù)等方法檢測和觀察分別及聯(lián)合應(yīng)用多西紫杉醇和順鉑對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞株的增殖抑制；建立裸鼠荷人骨肉瘤動(dòng)物模型，分別及聯(lián)合應(yīng)用多西紫杉醇和順鉑對(duì)其進(jìn)行治療，并設(shè)立空白對(duì)照。觀察瘤體的生長及病理指標(biāo)。［結(jié)果］多西紫杉醇和順鉑分別及聯(lián)合用藥，在一定范圍內(nèi)均對(duì)骨肉瘤細(xì)胞有明顯的增殖抑制和誘導(dǎo)凋亡作用，并且聯(lián)合用藥組作用明顯強(qiáng)于單獨(dú)用藥組，抑制率≥59.34%（P＜0.05；），凋亡率

2、18.31%（P＜0.01）。多西紫杉醇和順鉑單獨(dú)應(yīng)用均可抑制骨肉瘤瘤體的生長，腫瘤抑制指數(shù)分別為84.16%、78.53%；兩者聯(lián)合應(yīng)用時(shí)作用更為明顯.freel波長測定吸光度（A），計(jì)算腫瘤細(xì)胞抑制率：腫瘤細(xì)胞抑制率=（1-實(shí)驗(yàn)孔測定值/對(duì)照孔測定值）×100％。1.5流式細(xì)胞儀分析藥物處理24h后，收集細(xì)胞（1～5）×106個(gè)，1000r／min離心5min，棄去培養(yǎng)液，PBS1ml洗2次，離心，加入冰預(yù)冷的70％乙醇固定，4℃過夜；離心棄去固定液，加入PI染液1ml，于4℃避光染色30min，400目尼龍網(wǎng)過濾，用流式細(xì)胞儀檢測凋

3、亡率。1.6動(dòng)物模型的建立將液氮凍存的HOS-8603人體骨肉瘤細(xì)胞株復(fù)蘇，于CO2孵箱擴(kuò)增培養(yǎng)。取裸鼠（BALB／c-nu／nu）20只，4周齡，雌雄不拘，于恒溫（24～26℃）普通無菌室內(nèi)超靜生物層流架飼養(yǎng)，無菌操作。于每只裸鼠臀部皮下注入等體積細(xì)胞懸液，接種的細(xì)胞數(shù)為1×107個(gè)/只，4～5d后均可形成瘤體。1.7裸鼠分組及用藥1.7.1分組將形成骨肉瘤體的20只裸鼠分為4組，每組5只。A組單純予順鉑治療，B組單純予多西紫杉醇治療，C組予多西紫杉醇及順鉑聯(lián)合治療，D組予等體積生理鹽水注射作為空白對(duì)照。1.7.2給藥方式及劑量A、B、

4、C、D4組均經(jīng)鼠尾靜脈給藥，給藥劑量均為：多西紫杉醇20μg／g，順鉑10μg／g,分別在裸鼠成瘤后第1、7、14、21d給藥，共4次。1.8療效觀察1.8.1大體觀察每天觀察裸鼠的精神狀態(tài)、飲食及活動(dòng)靈敏度等一般狀況，定期測量裸鼠的體重及腫瘤大小。腫瘤體積按以下公式計(jì)算：體積（V）=長×寬2×0.2；計(jì)算腫瘤抑制指數(shù)（I.I）=（V對(duì)照組-V實(shí)驗(yàn)組）/V對(duì)照組×100％。1.8.2血涂片治療結(jié)束后自裸鼠眼眶活體取血作血涂片，鏡檢。1.8.3骨髓涂片治療結(jié)束后自裸鼠股骨骨髓腔活體取骨髓作骨髓涂片，鏡檢。1.8.4重要器官的檢查解剖取肝、脾

5、、肺、腎，甲醛固定后作蠟塊包埋、切片，行蘇木精-伊紅（HE）染色，鏡檢。1.8.5腫瘤的常規(guī)病理檢查取腫瘤精確測量其長短徑，甲醛固定后作蠟塊包埋、切片，行蘇木精-伊紅（HE）染色，鏡檢。1.9統(tǒng)計(jì)學(xué)處理計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x-±s）表示，應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件，采用單因素方差分析及多個(gè)樣本均數(shù)間的兩兩比較分析。2結(jié)果2.1形態(tài)學(xué)觀察在倒置顯微鏡下，空白組細(xì)胞呈多角形、紡錘形，核呈圓形，細(xì)胞貼壁生長良好、密集（圖1）。單用多西紫杉醇及順鉑時(shí)細(xì)胞多為菱形或不規(guī)則形，表現(xiàn)出不同程度的細(xì)胞皺縮，邊緣毛糙，部分細(xì)胞核染色質(zhì)固縮，聚集于核邊

6、，胞漿濃縮，部分可出現(xiàn)由核碎裂形成的凋亡小體（圖2），部分圓形細(xì)胞脫落而懸浮于培養(yǎng)液中。二者合用時(shí)可見細(xì)胞凋亡數(shù)進(jìn)一步增加，大量細(xì)胞脫落懸浮于培養(yǎng)液中，只剩少數(shù)細(xì)胞貼壁（圖3）。以上改變隨著藥物作用時(shí)間的延長而愈趨顯著。2.2多西紫杉醇和順鉑對(duì)骨肉瘤細(xì)胞的生長抑制作用各組藥物分別作用24、48h后，對(duì)HOS-8603細(xì)胞生長抑制作用見表1，表明：（1）細(xì)胞存活率與藥物濃度呈反比，且有明顯的劑量依賴性。（2）隨著時(shí)間的延長，藥物的敏感性增加，同一劑量的藥物有時(shí)間依賴關(guān)系。（3）以10μg／ml濃度多西紫杉醇協(xié)同8μg／ml濃度順鉑作用24、

7、48h組最為顯著，抑制率分別為（69.74±5.66）％、（78.18±7.44）％，與相應(yīng)濃度單藥作用組比較P＜0.01。表1多西紫杉醇（DTX）和順鉑（CDDP）對(duì)骨肉瘤細(xì)胞的增殖抑制作用（略）2.3細(xì)胞周期及DNA含量的變化流式細(xì)胞儀定量檢測細(xì)胞凋亡比例，結(jié)果見表2。2、3、4組分別與1組比較差異均有顯著性意義（P＜0.01）；2、3組與4組比較差異有顯著性意義（P＜0.01）；3組與2組比較差異亦有顯著性意義（P＜0.01）。表2流式細(xì)胞術(shù)檢測藥物對(duì)骨肉瘤細(xì)胞的凋亡率（略）*P＜0.01,vsControlgroup;#P＜0.0

8、1,vsDTX+CDDPgroup。2.4一般情況治療開始前，各組裸鼠體重變化的差異無顯著性，治療開始后，行多西紫杉醇治療的A、C2組裸鼠精神狀態(tài)逐漸萎靡，活動(dòng)減少，進(jìn)食飲水量較前減少，體重減