高效液相色譜法同時(shí)測定少毛北前胡中6種香豆素論文

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1、高效液相色譜法同時(shí)測定少毛北前胡中6種香豆素論文陳二林劉小花李文封士蘭胡芳弟宋平順【摘要】建立了同時(shí)測定少毛北前胡中6種香豆素(香柑內(nèi)酯、蟬翼素、絲立尼亭、順3′，4′二千里光?；?′，4′二氫邪蒿內(nèi)酯、白花前胡丁素和白花前胡素E)含量的HPLC分析方法。色譜柱為LotValidationC18(150mm×4.6mm,5μm)柱;流動(dòng)相為甲醇水;流速為0.8mL/min;檢測波長為323nm;柱溫30℃。6種香豆素在一定范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)為0.9992～0.9999;精密度RSD均低于3.95%;平均回收率為93.0%～98

2、.6%。本方法簡便、快速、準(zhǔn)確;并對(duì)其中一種香豆素化合物進(jìn)行分離純化，通過核磁、質(zhì)譜等光譜分析方法確認(rèn)了此化合物的結(jié)構(gòu)。【關(guān)鍵詞】少毛北前胡，香豆素，高效液相色譜法，結(jié)構(gòu)1引言前胡(RadixPeucedani)是一種應(yīng)用廣泛的傳統(tǒng)中藥.freel白花前胡(P.praerutorum)的干燥根，現(xiàn)代藥理研究證明前胡對(duì)支氣管炎、高血壓、冠心病等有一定的療效1。少毛北前胡(Peucedunumharrysmithiivarsubglabrum)，商品習(xí)稱硬桿前胡，主產(chǎn)于甘肅省的隴南、天水、隴東等地區(qū)2。香豆素類成分是前胡的主要有效成分，已測定了正

3、品前胡中總香豆素及部分香豆素的含量3～5，而對(duì)于少毛北前胡中香豆素的含量測定未見報(bào)道。本研究建立了HPLC測定少毛北前胡中6種香豆素(香柑內(nèi)酯、蟬翼素、絲立尼亭、順3′,4′二千里光?；?′,4′二氫邪蒿內(nèi)酯、白花前胡丁素和白花前胡素E)含量的方法。本方法快速、準(zhǔn)確，可用于少毛北前胡的質(zhì)量控制。運(yùn)用柱色譜及制備HPLC，分離純化了其中的一種香豆素化合物，利用核磁、質(zhì)譜及文獻(xiàn)對(duì)照確認(rèn)了此化合物的結(jié)構(gòu)，首次從少毛北前胡中分離得到此化合物。此外，分析比較了少毛北前胡與正品前胡中的香豆素成分，為少毛北前胡作為正品前胡代用品可行性研究提供了科學(xué)依

4、據(jù)。2實(shí)驗(yàn)部分2.1儀器與試劑Ultimate3000高效液相色譜儀(戴安公司)，包括四元泵、PhotodiodeArray檢測器、手動(dòng)進(jìn)樣器;GILSON制備高效液相色譜儀(依利特公司)，包括C18制備柱(250mm×20mm,10μm),SHIMADZUVPODS分析柱，UV/VIS152檢測器;HP5988氣質(zhì)聯(lián)用儀(美國熱電公司);MercuryPlus400M核磁共振波譜儀(Varian公司);R和CNMR數(shù)據(jù)及與文獻(xiàn)6～9對(duì)照確認(rèn)了它們的結(jié)構(gòu)(見圖1)。以HPLC面積歸一化法分析，純度均少毛北前胡于2006年9月采自甘肅省不同

5、縣，經(jīng)甘肅省藥品檢驗(yàn)所生藥室宋平順主任藥師鑒定。甲醇為色譜純(山東禹王試劑公司)，水為二次蒸餾水，其它試劑為分析純，購于天津科密歐試劑公司，色譜硅膠為青島海洋化工廠生產(chǎn)。1.香柑內(nèi)酯(bergapten);2.蟬翼素(pteryxin);3.絲立尼亭(selinidin);4.順3′,4′二千里光?；?′,4′二氫邪蒿內(nèi)酯(cis3′,4′disenecioyl3′,4′dihydroseselin);5.白花前胡丁素(peculedanumⅡ，PdⅡ);6.白花前胡素E(pecucedanumⅢ，PdⅢ)。2.2色譜條

6、件LotValidationC18色譜柱(150mm×4.6mm,5μm)，流動(dòng)相為甲醇水，洗脫程序如下：0～9min，V(甲醇)∶V(水)=77.5∶22.5;9～18min，100%甲醇;18～25min，V(甲醇)∶V(水)=77.5∶22.5。流速為0.8mL/min;柱溫為30℃;進(jìn)樣量為20μL;檢測波長為323nm。2.3對(duì)照品溶液的制備準(zhǔn)確稱取各對(duì)照品適量，用甲醇溶解并定容，得到0.0204g/L香柑內(nèi)酯、1.964g/L蟬翼素、0.0264g/L絲立尼亭、0.1014g/L順3′，4′二千里光?；?′，4′二氫邪蒿

7、內(nèi)酯、0.1642g/L白花前胡丁素和0.1106g/L白花前胡素E的對(duì)照品儲(chǔ)備液，4℃貯存?zhèn)溆谩?.4樣品溶液的制備分別取甘肅不同產(chǎn)地的少毛北前胡、白花前胡和紫花前胡藥材，粉碎，過0.30mm孔徑篩，準(zhǔn)確稱取1.000g，分別加氯仿50,40和30mL，超聲提取，每次30min，合并濾液，蒸干氯仿，殘?jiān)蛹状既芙猓ㄈ葜?0mL，經(jīng)0.40μm的微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣，測定。3結(jié)果與討論3.1化合物4的分離純化與結(jié)構(gòu)鑒定3.1.1分離純化少毛北前胡藥材經(jīng)甲醇提取，氯仿萃取后所得浸膏，先經(jīng)硅膠柱色譜進(jìn)行粗分離，洗脫劑為石油醚乙酸乙酯，所得

8、部分通過HPLC分析，摸索出所需物與雜質(zhì)較好的分離條件后，采用制備HPLC進(jìn)行分離純化，富集所需樣品。色譜條件為V(甲醇)∶V(水)=80∶20，室溫