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《結(jié)核分枝桿菌重組蛋白的制備及抗原性分析論文》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、結(jié)核分枝桿菌重組蛋白的制備及抗原性分析論文蘇明權(quán)，岳喬紅，周萍，段艷，楊柳，楊軍蘭，劉家云，郝曉柯【關(guān)鍵詞】結(jié)核分枝桿菌；抗原；基因表達(dá)；ELISAPreparationandantigenicityassayofrebinantproteinsofMycobacteriumtuberculosis【Abstract】AIM:TocloneandexpresstheMr16×103andMr38×103proteinsofMycobacteriumtuberculosisinE.coli.freelplifiedfromMycobacteriumtuberculosisgeno
2、meDNAbypolymerasechainreactionsandclonedintopGEX4T2expressionvectoraftersequencing.BL21strainofE.coliednchromatography.Theantigenicityandspecificityofpurifiedproteinsatedbyenzymelinkedimmunoabsorbantassay.RESULTS:TheBL21strainsofE.colig/L）andMr38×103（217mg/L）geneexpressionsafterinduction.The
3、sensitivityofMr16×103andMr38×103proteinstuberculosis.【Keytuberculosis；antigen；geneexpression；enzymelinkedimmunoabsorbantassay【摘要】目的：克隆表達(dá)結(jié)核分枝桿菌Mr16×103和Mr38×103重組蛋白，測(cè)定其抗原性和特異性.方法：利用聚合酶鏈反應(yīng)自結(jié)核分枝桿菌基因組DNA擴(kuò)增Mr16×103和Mr38×103抗原基因，經(jīng)測(cè)序鑒定后克隆于pGEX4T2表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化于大腸桿菌BL21菌株進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，利用GSTrapFF蛋白柱純化表達(dá)產(chǎn)物，通過酶聯(lián)免疫吸附
4、測(cè)定(ELISA)檢測(cè)其抗原性與特異性.結(jié)果：攜帶重組質(zhì)粒的菌株經(jīng)誘導(dǎo)產(chǎn)生的表達(dá)量分別為42％和18％；Mr16×103和Mr38×103蛋白量分別為：688mg/L和217mg/L.其中Mr16×103蛋白作為包被抗原ELISA法檢測(cè)的靈敏度為67.0％,特異性為100％,準(zhǔn)確性為84.0％；Mr38×103蛋白作為包被抗原ELISA檢測(cè)的靈敏度為79.8%,特異性為99%，準(zhǔn)確性為89.7%.結(jié)論：以Mr16×103，Mr38×103重組蛋白為抗原具有良好的抗原性和特異性，可用于結(jié)核分枝桿菌診斷方法的建立及臨床診斷.【關(guān)鍵詞】結(jié)核分枝桿菌；抗原；基因表達(dá)；ELISA【中圖號(hào)
5、】R3780引言結(jié)核病仍是目前危害全球人類健康的重要傳染病，我國(guó)每年約有13萬(wàn)人因結(jié)核病而死亡.對(duì)結(jié)核病的實(shí)驗(yàn)診斷主要依據(jù)細(xì)菌學(xué)檢查和血清學(xué)檢測(cè)，細(xì)菌學(xué)檢查繁瑣費(fèi)時(shí)，培養(yǎng)周期長(zhǎng)，達(dá)不到快速診斷的目的，血清學(xué)檢測(cè)是一種方便快捷的實(shí)驗(yàn)室診斷方法，血清學(xué)檢查的關(guān)鍵是結(jié)核分枝桿菌特異性抗原的提呈.我們利用基因工程重組方法，通過大腸桿菌表達(dá)結(jié)核分枝桿菌的Mr16×103和Mr38×103蛋白，以Mr16×103和Mr38×103重組蛋白為抗原，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定兩種抗原的反應(yīng)性和特異性，以期證實(shí)其在血清學(xué)診斷中的價(jià)值.1材料和方法1.1材料結(jié)核分枝桿菌H37RV標(biāo)準(zhǔn)株（菌株號(hào)：AT
6、CC27294）：購(gòu)自衛(wèi)生部國(guó)家菌種保存中心.E.coliDH5α，E.coliBL21由第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院檢驗(yàn)科保存；T4連接酶、限制性核酸內(nèi)切酶BamHⅠ,EcoRⅠDNA膠回收試劑盒、質(zhì)粒提取試劑盒均購(gòu)自Vitagene公司；GST親和層析柱GSTrapFF購(gòu)自Pharmacia公司；pGEX4T2表達(dá)載體購(gòu)自Pharmacia公司.1.2方法1.2.1結(jié)核分枝桿菌Mr16×103，Mr38×103抗原基因的PCR擴(kuò)增結(jié)核分枝桿菌H37Rv培養(yǎng)物經(jīng)煮沸滅活，蛋白酶K消化過夜，經(jīng)酚.氯仿抽提、乙醇沉淀純化DNA.通過PCR擴(kuò)增Mr16×103，Mr38×103基因.Mr1
7、6×103抗原基因引物為：5′AGGGGATCCATGGCCACCACCCTTCCCGTTCAG3′含BamHI酶切位點(diǎn)和起始密碼子，5′TCAGCTCGAGCCCAGTGGTCAGTTGGTGGACCG3′含XohI酶切位點(diǎn)和終止密碼子，預(yù)期擴(kuò)增產(chǎn)物435bp.Mr38×103基因引物為：5′AGGGGATCCGTGAAAATTCGTTTGCATACGCT3′含BamHI酶切位點(diǎn)和起始密碼子，5′GATGAATTCACGGAGGTTGCTGTCGCGTGGTG3′含XohI酶切位點(diǎn)和終止密
