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1、豬胸膜肺炎放線桿菌外膜蛋白型的研究山東農(nóng)業(yè)科學2011,3:103～105ShandongAgriculturalSciences豬胸膜肺炎放線桿菌外膜蛋白型的研究駱延波,劉霞¨,黃迪海,張從敬,劉曉飛,張華,徐秀榮',張再輝(I.山東省健牧生物藥業(yè)有限公司,山東濟南250100;2.萊州市畜牧獸醫(yī)站,山東萊州261400)摘要:對豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌(APP)12個血清的外膜蛋白型進行了測定.用N一十二烷酰肌氨酸法提取其主要外膜蛋白(OMPs),經(jīng)SDS—PAGE電泳后,用考馬斯亮蘭法進行染色,結(jié)果APP12個血清型的OMP可以分為6個OMP型,表明APP的OMP具有多樣性.關(guān)
2、鍵詞:胸膜肺炎放線桿菌;外膜蛋白型;SDS—PAGE中圖分類號:$852.619文獻標識號:A文章編號:1001—4942(2011)03一(,1n3—03StudyonOuterMembraneProteinPatternsofActinobacilluspieuropneumoniaeLUOYan—bo,LIUXia',HUANGDi—hai,ZHANGCong—jing,LIUXiao—fei,ZHANGHua,XUXiu—rong,ZHANGZai—hui(1.ShandongJianmuBZPharmaceuticalCo.,Ltd.,J/nan250100,China;2
3、.LaizhouAnimalHusbandryBureauofShandongProvince,Laizhou261400,China)AbstractTheoutermembraneproteins(OMPs)oftwelveserotypesofActinobacilluspleuropneumoniae(APP)wereextractedandroughlypurifiedbyN—Lauroylsareosine.AfterSDS—PAGEandstainedbyCom—massiebrilliantblue,theyweresemtypedtosixpatterns,whic
4、hindicatedtheOMPmultiformityofAPP.KeywordsActinobacilluspleuropneumniae;Outermenbraneproteinpattern;SDS—PAGE豬傳染性胸膜肺炎(Porcinecontagiouspleu—ropneumonia)是由胸膜肺炎放線桿菌(Actinobacil-luspleuropneumoniae,APP)引起的以胸膜肺炎和出血性壞死性肺炎為特征的一種高度傳染性和致死性的呼吸系統(tǒng)疾病.APP引起豬致病有幾個毒力因素,包括莢膜多糖(CP),脂多糖(LPS),外膜蛋白(OMP),轉(zhuǎn)鐵結(jié)合蛋白(Tbp)
5、,蛋白酶,滲透因子(PF)及溶血素(Hly)等.小鼠進行免疫保護試驗表明,任何一種單一的抗原,包括溶血素在內(nèi)以及CP,LPS和OMP都只能提供部分的保護力,而不能誘導完全的保護.研究顯示外膜蛋白除上述免疫保護作用外,還在豬白細胞的吞噬作用中起調(diào)理作用¨.OMP型是由主要OMPs及其差異決定的.主要OMPs的亞單位在SDS—PAGE中的分子量為29,39,50,76ku[2],分別為質(zhì)粒編碼蛋白(plasmidencodedproteins,PCP),ompA蛋白(ompAproteins),K蛋白(Kproteins)和微孑L蛋白(por-ins)3..根據(jù)是否依賴NAD可將APP分
6、為兩個生物型:生物I型和生物Ⅱ型.根據(jù)APP的莢膜抗原和細菌脂多糖的不同,又將生物I型分為l2個血清型(生物1型～生物l2型).目前,國內(nèi)對APP的這12個血清型外膜蛋白的研究還未見報道,筆者對其進行了初步的研究.1材料與方法1.1菌株與培養(yǎng)基收稿日期:2010—10-09基金項目:山東省農(nóng)業(yè)科學院2007年青年基金支持項目.作者簡介:駱廷波(1973一),男,副研究員,現(xiàn)從事預(yù)防獸醫(yī)學研究及新獸藥研制工作.E—mail:luoyanbosaas@163.com+通訊作者l04山東農(nóng)業(yè)科學2011年豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌1—12個血清型由本實驗室分離,保存.細菌培養(yǎng)用LB液體培養(yǎng)基
7、.1.2試劑OMP分離所用的N一十二烷酰肌氨酸(N—Lauroylsarcosine)和N一2一羥乙基哌嗪一N一2一乙磺酸(HEPES)分別為Sigma公司和上海伯奧生物科技有限公司(進口分裝)產(chǎn)品;SDS—PAGE所用丙烯酰胺,三羥甲基氨基甲烷(Tfis)分別購自上海伯奧生物科技有限公司(進口分裝)和北京夏斯生物有限公司;甲叉雙丙烯酰胺,過硫酸氨和十二烷基磺酸鈉(SDS)均購自北京鼎國生物技術(shù)發(fā)展中心(Sigma分裝).SDS—PAGE考馬斯亮藍染色法除
