1.1植物根系酸性磷酸酶活性測定

ID:10866007

大?。?4.00 KB

頁數(shù):2頁

時間:2018-07-08

1.1植物根系酸性磷酸酶活性測定_第1頁
1.1植物根系酸性磷酸酶活性測定_第2頁
資源描述:

《1.1植物根系酸性磷酸酶活性測定》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。

1、植物根系酸性磷酸酶活性測定1.原理該方法以對硝基苯磷酸二鈉(即p-NPP)為底物,該底物在土壤酸性磷酸酶的催化下水解生成黃色的對硝基苯酚(即p-NP),該黃色溶液在410nm處有最大吸收光值,根據(jù)對硝基苯酚的生成數(shù)量與黃色溶液的吸光度呈正比來進行定量分析,以此來反映土壤酸性磷酸酶的活性。酶活性是以單位時間內單位重量鮮根或單株根系水解p-NPP生成的對硝基苯酚(p-NP)的量來表示(μg·h-1·g-1鮮根或μg·h-1/株)。2.測定方法1)稱?。?.2±0.1)g鮮根,加入8mL0.2mol/L醋酸鈉緩沖液(pH5.8),然后進行冰浴研磨,雙層紗布過濾,12000

2、r/min離心15min,靜置。2)取上清液1mL于15mL離心管中,加入2mL0.05mol/L對硝基苯磷酸二鈉(醋酸鈉緩沖液配制),搖勻后加蓋,于37℃水浴30min。3)水浴后加入2mL0.5mol/LCaCl2及2mL2mol/LNaOH以終止反應,搖勻。4)2500r/min離心5min,取上清液于15mL離心管中,4000r/min下再離心5min。5)取上清液在410nm波長比色,并記錄吸光值A410。3.標準曲線的制作1)取13支15mL離心管,按順序編號,并按表1加入試劑。表1對硝基苯酚標準曲線配制表離心管號01234560.005μmol/mLp

3、NP(mL)00.010.020.030.040.050.06H2O(mL)0.80.790.780.770.760.750.74pNP含量(μmol)00.000050.00010.000150.00020.000250.0003離心管號7891011120.005μmol/mLpNP(mL)0.070.080.090.100.110.12H2O(mL)0.730.720.710.700.690.68pNP含量(μmol)0.000350.00040.000450.00050.000550.0006搖勻0.2mol/LpH6.5醋酸鈉緩沖液80.5mol/LCaC

4、l2(mL)22mol/LNaOH(mL)22)混勻后,在2500r/min下離心5min,再在4000r/min下離心5min以0號作為對照,在410nm波長下測光吸收值,并記錄光吸收值A410。3)以吸光值為橫坐標、對硝基苯酚的含量為縱坐標計算直線回歸方程y=a+bx及相關系數(shù)R,即對硝基苯酚含量。4.計算方法根系酸性磷酸酶活性是以單位時間內單位重量鮮根或單株根系水解p-NPP生成的對硝基苯酚(p-NP)的量來表示(μg·h-1·g-1鮮根或μg·h-1/株)。即式中:n—標準曲線上查得樣品中對硝基苯酚的濃度(μmol);M—對硝基苯酚的相對分子質量(139.1

5、1g/mol);t—反應時間(h);W—樣品鮮重(g)。稀釋倍數(shù)—8a.醋酸鹽緩沖液(pH=5.0)A:0.2mol/L醋酸溶液(11.5mL,稀釋至1000mL)B:0.2mol/L醋酸鈉溶液(16.4gC2H3O2Na或27.2gC2H3O2Na·3H2O定容至1000mL)14.8mlA+35.2mlB混合即得

當前文檔最多預覽五頁,下載文檔查看全文

此文檔下載收益歸作者所有

當前文檔最多預覽五頁,下載文檔查看全文
溫馨提示:
1. 部分包含數(shù)學公式或PPT動畫的文件,查看預覽時可能會顯示錯亂或異常,文件下載后無此問題,請放心下載。
2. 本文檔由用戶上傳,版權歸屬用戶,天天文庫負責整理代發(fā)布。如果您對本文檔版權有爭議請及時聯(lián)系客服。
3. 下載前請仔細閱讀文檔內容,確認文檔內容符合您的需求后進行下載,若出現(xiàn)內容與標題不符可向本站投訴處理。
4. 下載文檔時可能由于網(wǎng)絡波動等原因無法下載或下載錯誤,付費完成后未能成功下載的用戶請聯(lián)系客服處理。
关闭