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1、化瘀通絡(luò)中藥對糖尿病腎病大鼠腎組織CTGFmRNA表達(dá)的影響論文尹智煒高俊杰陳志強(qiáng)孫玉鳳丁奇峰王月華張江華【摘要】觀察化瘀通絡(luò)中藥—腎絡(luò)通對實(shí)驗(yàn)性大鼠糖尿病腎病(DN)模型腎功能及腎組織結(jié)締組織生長因子(CTGF)mRNA表達(dá)的影響。方法SD大鼠40只隨機(jī)分為正常組、模型組、對照組和中藥組，模型組、對照組和中藥組應(yīng)用鏈脲佐菌素(STZ)60mg/kg一次性腹腔注射制備大鼠糖尿病模型。中藥組給予腎絡(luò)通煎劑灌胃25g/(kg·d)，對照組給予貝那普利水溶液10mg/(kg·d)，正常組和模型組給予等量0.9%
2、氯化鈉注射液灌胃。檢測各組大鼠24h尿蛋白、血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)和腎組織CTGFmRNA的表達(dá)。結(jié)果模型組24h尿蛋白、BUN、Cr和腎組織CTGFmRNA的表達(dá)均顯著高于正常組(P0.01)；對照組和中藥組24h尿蛋白、BUN、Cr和腎組織CTGFmRNA的表達(dá)與模型組相比顯著降低(P0.01)。結(jié)論化瘀通絡(luò)中藥能夠顯著減少DN模型大鼠24h尿蛋白，保護(hù)DN模型大鼠腎臟功能，并可從基因水平顯著降低腎組織CTGF的表達(dá)，提示下調(diào)CTGF的表達(dá)可能是化瘀通絡(luò)中藥保護(hù)DN模型大鼠腎功能的重要機(jī)制
3、。【關(guān)鍵詞】糖尿病腎病大鼠SD腎功能結(jié)締組織生長因子【Abstract】ObjectiveToobserveeffectsofdispersingbloodstasisanddredgingcollateral—ShenluotongonrenalfunctionandexpressionofCTGFmRNAindiabeticnephropathy(DN)rats’kidney.MethodsTheratslydividedintofourgroupsincludingnormalgroup,model
4、group,controlgroupandTraditionalChineseMedicine(TCM)group.TheDNmodelofratadethroughone-timeinjectionofperitonealofstreptozotocin(STZ)60mg/kg.TCMgroupinistratedodelgroupinistratedg/kg·d,NormalgroupandmodelgroupRNAinnephridialtissuealgroup,24hoururinaryprot
5、ein,Scr,BUNandtheexpressionofCTGFmRNAinnephridialtissueofmodelgroupodelgroup,thoseofTCMandControlgroupRNAinnephridialtissue.Itindicatedthatdoaybeanimportantatrix,ECM)增生.freelRNA表達(dá)的影響，從分子水平探討化瘀通絡(luò)中藥的可能作用機(jī)制，為中藥治療DN提供新的思路。1材料與方法1.1動(dòng)物清潔級健康雄性Sprague-Dauley系大鼠40
6、只，體質(zhì)量(180±10)g，由河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，動(dòng)物合格證號：冀醫(yī)動(dòng)管字07259號。1.2化瘀通絡(luò)中藥腎絡(luò)通，由地龍、烏梢蛇、丹參、黃芪等組成，按比例稱取后，水煎、過濾，濃縮至含生藥1.5g/mL。裝入瓶中密封保存于4℃冰箱中。飲片經(jīng)過鑒定均為正品，由河北醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)院制劑室提供，并經(jīng)過鑒定均為正品。1.3造模與分組大鼠自由飲水，常規(guī)飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，進(jìn)行尿蛋白定性檢測，結(jié)果全部為陰性。隨機(jī)分為正常組、模型組、對照組和中藥組，每組10只。除正常組外，其他各組按60mg/kg一次性腹腔注
7、射STZ，自由飲水、攝食，72h后尾靜脈取血快速血糖儀測隨機(jī)血糖，以≥16.7mmol/L為糖尿病模型成模標(biāo)準(zhǔn)［3］。正常組注射相應(yīng)量0.9%氯化鈉注射液。造模各組在糖尿病模型建立后，按血糖水平重新分組，組別與動(dòng)物數(shù)不變。1.4給藥與取材成模后1周開始給藥，中藥組給予腎絡(luò)通煎劑灌胃25g/(kg·d)，對照組給予貝那普利水溶液10mg/(kg·d)，對照組、中藥組用藥量均相當(dāng)于臨床人用劑量的20倍。正常組和模型組給予等量0.9%氯化鈉注射液灌胃，均每日1次。1.5取材給藥第16周末，各組大鼠置于代謝籠中，
8、禁食不禁水收集大鼠24h尿液；10%水合氯醛30mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈取血，分離血清，然后迅速取腎組織置于液氮中，再轉(zhuǎn)存于-70℃超低溫冰箱中待檢。1.6生化指標(biāo)檢測雙縮脲法定量24h尿蛋白，Beckmancx7全自動(dòng)生化分析儀檢測血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)等生化指標(biāo)。1.7CTGFmRNA檢測各組腎組織采用Trizol一步法提取總RNA，CTGF引物由上海中生生物工程公司合成，其序列為5′-GAAAGA
