何首烏對(duì)老齡大鼠免疫功能的影響論文

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1、何首烏對(duì)老齡大鼠免疫功能的影響論文熊平源王強(qiáng)郭凱文唐朝暉白惠卿【摘要】目的：了解何首烏對(duì)老齡大鼠免疫功能的影響。方法：采用溶血素測(cè)定法檢測(cè)何首烏對(duì)老齡大鼠溶血素抗體產(chǎn)生的影響；參照LDH法檢測(cè)何首烏對(duì)老齡大鼠NK細(xì)胞活性的影響；采用3HTdR摻入法檢測(cè)何首烏對(duì)老齡大鼠淋巴細(xì)胞增殖活性的影響；采用姬姆薩染色法檢測(cè)老齡大鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能。結(jié)果：藥物實(shí)驗(yàn)組與老齡對(duì)照組比較，溶血素抗體產(chǎn)生水平明顯增加(P0.01)；NK細(xì)胞的細(xì)胞毒活性明顯增強(qiáng)(P0.01)；T、B淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化增殖活性增強(qiáng)（P0.05；P0.01）；腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能也明顯

2、增強(qiáng)。結(jié)論：何首烏能增強(qiáng)老齡大鼠的免疫功能?！娟P(guān)鍵詞】何首烏；溶血素抗體；NK細(xì)胞；淋巴細(xì)胞；腹腔巨噬細(xì)胞現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，何首烏（TuberFleecefloan公司產(chǎn)品；DG3022型酶聯(lián)免疫測(cè)定儀，華東電子管廠產(chǎn)品；CO2培養(yǎng)箱，美國(guó)NaPCo.產(chǎn)品；DYQIII型微量多頭細(xì)胞收集器，紹興醫(yī)療器械廠產(chǎn)品。2方法與結(jié)果21何首烏對(duì)老齡大鼠體液免疫功能的影響采用溶血素測(cè)定法［3］。取2×108個(gè)/mL綿羊紅細(xì)胞，按每只鼠0.5mL腹腔注射,免疫4d后,將小鼠處死,摘除小鼠眼球,將每只小鼠血分別滴至小試管內(nèi),室溫放置1h,使血清充分滲出后離心,上

3、層血清用生理鹽水稀釋后取1mL,再加入0.5mL綿羊紅細(xì)胞，置冰浴中冷卻，加入1mL補(bǔ)體,離心，取上清液1mL及3mL都氏度劑,震蕩均勻，放置10min，于540nm波長(zhǎng)下比色，測(cè)定樣品及綿羊紅細(xì)胞半數(shù)溶血時(shí)的OD540值。結(jié)果見圖1。圖1何首烏對(duì)老齡大鼠溶血素抗體的影響（略）圖1結(jié)果顯示，老年對(duì)照（OM）組與青年對(duì)照(YC)組比較，抗體產(chǎn)生水平明顯低下(P0.05)；而藥物實(shí)驗(yàn)組與老齡對(duì)照組比較,則抗體產(chǎn)生水平明顯增加(P0.01)。22NK細(xì)胞活性測(cè)定參照LDH法，取脾細(xì)胞懸液（2×107/mL）0.25mL作為效應(yīng)細(xì)胞,.freelL）0

4、.05mL于96孔培養(yǎng)板中，,使效靶比為50∶1。同時(shí)設(shè)效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞對(duì)照,每份樣品設(shè)3個(gè)復(fù)孔,置37℃5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6h。加入3HTdR0.5μCi/孔，培養(yǎng)6h后收獲，置于液體閃爍儀中測(cè)cpm值［4，5］。結(jié)果見圖2。圖2何首烏對(duì)老齡大鼠NK細(xì)胞活性的影響（略）圖2結(jié)果顯示，老年對(duì)照（OM）組與青年對(duì)照(YC)組比較，NK細(xì)胞活性明顯低下(P0.05)；而藥物實(shí)驗(yàn)組與老齡對(duì)照組比較,則NK細(xì)胞活性明顯增強(qiáng)(P0.01)。23何首烏對(duì)老齡大鼠脾細(xì)胞增殖的影響無菌取大鼠脾細(xì)胞,洗滌兩次,用含10%小牛血清的IMDM培養(yǎng)液調(diào)細(xì)胞濃度至

5、5×106/mL,加入96孔培養(yǎng)板每孔100μL。然后分別加入ConA和LPS100μL（每份樣品設(shè)3個(gè)復(fù)孔），置CO2孵箱培養(yǎng)68h，培養(yǎng)結(jié)束前8h摻入3HTdR2.85μBq/孔,收獲細(xì)胞,測(cè)定閃爍值［6］。圖3何首烏對(duì)老齡大鼠脾細(xì)胞增殖活性的影響（略）圖3結(jié)果顯示,何首烏能增加老齡大鼠脾細(xì)胞對(duì)ConA和LPS的增殖活性,說明何首烏對(duì)老年大鼠T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化增殖有促進(jìn)作用。其中藥物實(shí)驗(yàn)組對(duì)ConA的增殖活性，與老年對(duì)照組比較P0.01；而藥物實(shí)驗(yàn)組對(duì)LPS的增殖活性，與老年對(duì)照組比較P0.05。24何首烏對(duì)老齡大鼠腹腔巨噬細(xì)胞

6、吞噬功能的影響實(shí)驗(yàn)前3天，腹腔注射2%糖原2mL作為巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)劑。測(cè)時(shí)脫頸椎處死小鼠，用pH6.5~pH6.7的無鈣鎂Hank′s液2mL洗出全部腹腔巨噬細(xì)胞，取1mL腹腔洗液置于5mL離心管中，加入10%雞紅細(xì)胞0.2mL，插入5×20mm2蓋玻片條，經(jīng)37℃30min后取出，洗滌，固定，姬姆薩染色，油鏡下計(jì)數(shù)巨噬細(xì)胞吞噬百分率，并計(jì)算其吞噬指數(shù)［7］。結(jié)果見表1。表1何首烏對(duì)老齡大鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響（略）注：*與青年對(duì)照組比較，P0.001；**與老年對(duì)照組比較，P0.01。表1結(jié)果顯示，與青年對(duì)照組比較，老年對(duì)照組腹腔巨噬細(xì)胞吞

7、噬功能明顯低下(P0.001)；與老年對(duì)照組比較，藥物實(shí)驗(yàn)組腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能明顯增強(qiáng)(P0.01)。3討論免疫衰老狀態(tài)下的機(jī)體，脾淋巴細(xì)胞過度凋亡，其免疫應(yīng)答功能下降、細(xì)胞因子水平低下、免疫監(jiān)視功能減退。有報(bào)道提示，隨著衰老，每一種細(xì)胞因子不同分泌量的變化都對(duì)免疫衰老進(jìn)程有不同影響，如Th1類細(xì)胞因子減少，Th2類細(xì)胞因子分泌增多，伴隨著這種Th1/Th2的不平衡可顯著刺激Th3呈高分泌狀態(tài)，導(dǎo)致機(jī)體的抗免疫衰老機(jī)制受到嚴(yán)重干擾［2］。衰老狀態(tài)下，B細(xì)胞的成熟過程明顯減慢，成熟周期延長(zhǎng)，其各亞型的活力不同程度下降，產(chǎn)生抗體的能力及免疫應(yīng)答反應(yīng)

8、亦隨增齡而降低；老年機(jī)體胸腺細(xì)胞數(shù)減少，T細(xì)胞增殖力也低下，在T細(xì)胞亞群中，胸腺細(xì)胞毒型T細(xì)胞（CTL）的免疫殺傷活性明顯下降，對(duì)同種細(xì)