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1、RP-HPLC測定小承氣湯中番瀉苷A含量摘要:目的:建立小承氣湯中番瀉苷A的HPLC含量測定方法｡方法:采用SinochromC18柱(250mm×4.6mm),流動相:乙腈:水:冰醋酸(60:35:5),流速:1.0ml/min,檢測波長:340nm｡結(jié)果:番瀉苷A在0.2～1.0μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系,回歸方程為Y=124.72X+6.5(r=0.9995)｡結(jié)論:所建立的HPLC方法可用于小承氣湯的質(zhì)量控制｡關(guān)鍵詞:HPLC小承氣湯番
2、瀉苷A小承氣湯出自《傷寒論》,適用于陽明腑實證，可以治療粘連性腸梗阻､腸麻痹､慢性胃炎等[1]｡小承氣湯現(xiàn)代處方：大黃12g､厚樸6g､枳實9g,水煎服[2]｡有關(guān)小承氣湯的質(zhì)量研究文獻報道很少，胡曉靜等測定了小承氣湯中的大黃酸和厚樸酚的含量[3],而大黃中番瀉苷A的含量測定則未見報道｡本文通過HPLC測定小承氣湯中番瀉苷A的含量,為小承氣湯今后的深入研究提供參考｡1材料與方法1.1儀器與試劑1.
3、1.1儀器BF-KNAUER高效液相色譜儀,K-501高壓輸液泵,K-2501紫外分光檢測器,BF-2002色譜工作站;FA21045萬分之一電子天平(上海精密科學儀器有限公司天平儀器廠)｡TY-CZ1006超聲波清洗儀(常州天億電子設備有限公司)1.1.2藥材與試劑藥材購于長沙市老百姓大藥房,經(jīng)本校生藥教研室鑒定,大黃為RheumofficinaleBaill的根莖;枳實為CitrusanrantiumL.的干燥幼果;厚樸為MagnoliaofficinalisRehd.etWils番瀉苷A
4、(日本純藥工業(yè)株式會提供)｡乙腈為色譜純,其余所用試劑均為分析純｡1.2實驗方法1.2.1小承氣湯的制備按處方比例分別稱取大黃12g､厚樸6g､枳實9g,按參考文獻方法精密加入10倍量水浸泡1h后,電爐直火加熱回流1h[4],冷卻至室溫,抽濾即得小承氣湯樣品液｡1.2.2陰性對照液的制備按處方比例稱取厚樸6g､枳實9g,按2.1進行制備,得陰性小承氣湯樣品液｡1.2.3大黃煎煮液的制備稱取大黃12g,按2.1進
5、行制備,得大黃單煎液｡2結(jié)果番瀉苷A的測定｡2.1色譜條件依立特Sinochrom5C18柱(250mm×4.6mm);流動相:乙腈:水:冰醋酸(60:35:5);流速:1.0ml/min;柱溫:30℃;檢測波長:340nm;進樣量:20μl｡2.2標準曲線的繪制精密稱取番瀉苷A5mg,以pH8.0的磷酸緩沖液溶解,并定容至50ml,得番瀉苷A貯備液｡精密吸取該溶液5ml，用70%甲醇定容至10ml,在所設定的HPLC條件下,以上述溶液分別進樣4μl&
6、#65380;6μl､8μl､10μl､20μl,以峰面積（Y）為縱坐標,進樣量(X，μg)為橫坐標,得到標準曲線為Y=12472X+265(r=0.9995)｡2.3精密度試驗取上述番瀉苷A溶液,在上述色譜條件下測定,重復進樣5次,結(jié)果番瀉苷ARSD為1.97%，結(jié)果表明,進樣精密度良好｡2.4穩(wěn)定性實驗取小承氣湯樣品溶液按“樣品液中番瀉苷A含量測定”項下方法處理,分別于0,2,4,8,12,24h對樣品進行分析,RSD為3.2%
7、5377;2.5重復性實驗取小承氣湯樣品溶液3份(每份25ml)，按“樣品液中番瀉苷A含量測定”項下方法處理,測定并計算番瀉苷A含量,RSD為2.2%｡2.6大黃藥材中番瀉苷A的含量測定[5]精密稱取大黃粉末5g入具塞試管中,精密加入pH58.O的磷酸鹽緩沖液20ml,40℃超聲波提取30min，3000r/min離心10min，精密量取5ml，加70%甲醇定容至10ml,按上述條件,進樣量為10μl,測得原藥材中番瀉苷A的含量為0.28mg/g｡2.7樣品液中番瀉苷A含量測定:
8、分別精密量取各樣品溶液25ml，60℃水浴上蒸干，加入pH8.0的磷酸鹽緩沖液20ml，40℃超聲波提取30min，3000r/min離心10min，精密量取5ml，加70%甲醇定容至10ml，按上述條件,進樣量為20μl,番瀉苷A含量(μg/ml)結(jié)果:大黃單煎液18.76,小承氣湯樣品液19.04,陰性對照液(-)｡色譜圖見圖1,圖2｡2.8加樣回收率實驗精密量取小承氣湯樣品溶液3
