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1、高效液相色譜法測定注射用黃芩莖葉總黃酮中野黃芩苷的含量論文李國軍,毛曉霞,蘇占輝,劉玉翠,陳四平【摘要】目的測定注射用黃芩莖葉總黃酮中野黃芩苷的含量。方法高效液相色譜法。結(jié)果野黃芩苷進(jìn)樣量在0.91~4.55μg范圍內(nèi),峰面積積分值與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系,r=0.9999,平均加樣回收率為99.23%.freelstemsandleavesofScutellariabaicalensisGeorgi,SSF),其化學(xué)成分主要包括野黃芩苷、黃芩苷、芹菜素苷、白楊素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷等黃酮類
2、化合物。其中野黃芩苷具有清熱解毒、擴(kuò)張血管、改善體內(nèi)微循環(huán)等明顯藥理活性[1]。藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)黃芩莖葉總黃酮具有較強(qiáng)的抗病毒、抗炎、抗氧化、降血脂和較強(qiáng)的記憶改善作用[2~4]。為了有效地發(fā)揮黃芩莖葉的藥用價值,方便急診及不能口服藥物的病人,我們將黃芩莖葉有效成分精制純化,研制了注射用黃芩莖葉總黃酮。本實驗通過建立HPLC法測定注射用黃芩莖葉總黃酮中野黃芩苷含量的方法來控制制劑的內(nèi)在質(zhì)量。1儀器與試藥1.1儀器Shimadzu10ATvp高效液相色譜儀,CLASSvp5.0色譜數(shù)據(jù)工作站,瑞士產(chǎn)梅特A
3、G-245型電子分析天平,惠普HP-8453紫外可見分光光度計,KQ-100E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。1.2試藥野黃芩苷對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號110842-200504),注射用黃芩莖葉總黃酮(承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所研制)。2方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱為DiscoveryC18(4.6mm×250mm,5μm);流動相為以甲醇-0.1%甲酸溶液進(jìn)行梯度洗脫,0~30min由40%的甲醇的0.1%甲酸溶液增加到70%甲醇的0.1%甲酸溶液;流速0.8ml/min;檢測波
4、長335nm;柱溫26℃;進(jìn)樣量10μl。2.2檢測波長的選擇將野黃芩苷對照品溶液進(jìn)行光譜掃描,結(jié)果最大吸收波長為335nm,故選擇335nm為檢測波長。2.3對照品溶液的制備精密稱取五氧化二磷減壓干燥器中干燥24h的野黃芩苷對照品22.75mg至50ml量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為對照品儲備液(0.455mg/ml),備用。精密吸取上述溶液5ml至10ml量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻;作為對照品溶液(0.2275mg/ml)。2.4供試品溶液的制備取黃芩莖葉總黃酮凍干粉10mg,精密
5、稱定,置10ml量瓶中,加甲醇適量,超聲處理20min使溶解,放冷,補(bǔ)加甲醇至刻度,搖勻,放置,取上清液用微孔濾膜(0.45μm)濾過,取續(xù)濾液,作為供試品溶液。2.5空白試驗按照樣品制備工藝,制成不含黃芩莖葉總黃酮成分的空白凍干粉針,作為陰性對照,同法測定。結(jié)果空白凍干粉在與野黃芩苷對照品相同保留時間處無色譜峰,故認(rèn)為無干擾。2.6線性關(guān)系考察精密吸取濃度為0.455mg/ml的野黃芩苷對照品儲備液2,4,6,8,10μl依次注入色譜儀中,在前述色譜條件下,測定野黃芩苷的峰面積,結(jié)果見表1。以進(jìn)樣量
6、X(μg)為橫坐標(biāo),峰面積Y為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線,見圖1?;貧w處理得直線方程為Y=5×106X-351032,r=0.9999。表1線性關(guān)系測定結(jié)果(略)x【摘要】目的測定注射用黃芩莖葉總黃酮中野黃芩苷的含量。方法高效液相色譜法。結(jié)果野黃芩苷進(jìn)樣量在0.91~4.55μg范圍內(nèi),峰面積積分值與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系,r=0.9999,平均加樣回收率為99.23%,RSD=2.21%。結(jié)論該法可以用于該藥的質(zhì)量控制?!娟P(guān)鍵詞】注射用黃芩莖葉總黃酮野黃芩苷高效液相色譜法黃芩莖葉為唇形科植物黃芩Scu
7、tellariabaicalensisGeorgi的干燥地上部分,其有效部位為黃芩莖葉總黃酮(totalflavonoidsfromstemsandleavesofScutellariabaicalensisGeorgi,SSF),其化學(xué)成分主要包括野黃芩苷、黃芩苷、芹菜素苷、白楊素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷等黃酮類化合物。其中野黃芩苷具有清熱解毒、擴(kuò)張血管、改善體內(nèi)微循環(huán)等明顯藥理活性[1]。藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)黃芩莖葉總黃酮具有較強(qiáng)的抗病毒、抗炎、抗氧化、降血脂和較強(qiáng)的記憶改善作用[2~4]。為了有
8、效地發(fā)揮黃芩莖葉的藥用價值,方便急診及不能口服藥物的病人,我們將黃芩莖葉有效成分精制純化,研制了注射用黃芩莖葉總黃酮。本實驗通過建立HPLC法測定注射用黃芩莖葉總黃酮中野黃芩苷含量的方法來控制制劑的內(nèi)在質(zhì)量。1儀器與試藥1.1儀器Shimadzu10ATvp高效液相色譜儀,CLASSvp5.0色譜數(shù)據(jù)工作站,瑞士產(chǎn)梅特AG-245型電子分析天平,惠普HP-8453紫外可見分光光度計,KQ-100E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。1.2試藥野黃芩