棉花根莖葉中黃酮類化合物的超聲提取及含量測定論文

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1、棉花根莖葉中黃酮類化合物的超聲提取及含量測定論文馬彥梅李炳奇廉宜君，劉紅【摘要】目的尋找在超聲條件下從棉花根、莖、葉中提取黃酮的優(yōu)化條件，并測定與比較植株不同部位黃酮類化合物的含量。方法提取采用正交設(shè)計(jì)法，以乙醇濃度、提取次數(shù)、提取溫度及固液比為因素，每個因素3個水平進(jìn)行正交設(shè)計(jì)；用紫外分光光度法測定黃酮含量。結(jié)果最佳提取條件為：乙醇濃度60%，超聲溫度25℃，固液比1∶10，提取3次。黃酮含量分別為：葉0.494%.freelumultrasonicextractiontechnologyconditionforflavonoidsfromtheroot,ste

2、mandleafofcotton,anddetermineandparetheconcentofflavonoidsofdifferentpartsofcotton.MethodsOrthogonaldesignes,extractiontemperature,materialandsolventratio)atthreelevelsrespectively,anddeterminethecontentofflavonoidsbyultrovioletspectrophotometry.ResultsTheoptimumextractionconditionsat

3、erialandsolventratio1∶10for25℃ultrasonicextractionfor3times.Thecontentofflavonoid0.398%,taproot0.268%,lateralroot0.257%,petiole0.289%.ConclusionTheorderofthecontentofflavonoidsofdifferentpartsofcottonisleaf﹥stem﹥taproot﹥lateralroot﹥petiole.Keyination在生態(tài)系統(tǒng)中，農(nóng)業(yè)環(huán)境日益惡化是一個嚴(yán)峻事實(shí)，造成這種狀況的原因雖是一

4、個涉及面極為廣泛的問題，但其重要原因之一是長期、大量的使用化學(xué)殺蟲劑而產(chǎn)生了“農(nóng)藥公害”。植物源殺蟲劑具有對害蟲高效、無殘毒，不污染農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境和農(nóng)產(chǎn)品，對非靶標(biāo)生物無明顯影響等特點(diǎn)。棉花的根、莖、葉中存在的黃酮類化合物,有著重要的抗病蟲害作用。在我國的棉花抗蟲（?。┬曰A(chǔ)研究中，棉花黃酮一直是備受注目的次生代謝產(chǎn)物，它們具有對有害生物抗生性、阻食性、抗孢子和酶抑制性的作用［1］，是一類具有很大潛力的抗蟲（?。┪镔|(zhì)。新疆是我國最大的產(chǎn)棉區(qū)，年產(chǎn)量一直保持在150萬噸左右，占全國棉花總產(chǎn)量的1/3，棉桿、葉資源每年達(dá)600~750萬噸［2］。為了充分利用新疆這一寶貴

5、資源，筆者對棉花根、莖、葉中的黃酮類化合物進(jìn)行了提取和含量測定，以便為后續(xù)研究打下良好的基礎(chǔ)。1儀器與材料1.1儀器Spectrumlab54紫外可見分光光度計(jì)（上海棱光技術(shù)有限公司）；HF-2.5B超聲循環(huán)提取機(jī)（北京弘祥降生物技術(shù)開發(fā)有限公司）；電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）；TDL-5臺式離心機(jī)(上海安亭儀器廠)。1.2試劑和材料乙醇、甲醇、氫氧化鈉、濃硫酸、苯酚(5%)、鹽酸、氫氧化鉀(10%)、氫氧化鈉(均為分析純)。棉花根、莖、葉等。(取自石河子大學(xué)農(nóng)學(xué)院試驗(yàn)場)。2方法2.1黃酮含量測定方法本研究以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，用紫外分光光度計(jì)測定黃酮含量。標(biāo)

6、準(zhǔn)曲線的繪制：精密稱取120℃干燥至恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品適量，加水溶解，轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻（每毫升含蘆丁0.2mg），精密吸取此溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml，分別置于25ml容量瓶中，各加60%乙醇至10ml，分別加入5%NaNO2溶液0.3ml,放置6min，然后加入10%Al(NO3)3溶液0.3ml，混勻，再放置6min，加入4%NaOH溶液4ml，用水稀釋至刻度，混勻，放置15min，在分光光度計(jì)上掃描波長從400～600nm之間的吸收度,.freel波長處有最大吸收值,以吸光度為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃

7、度為橫坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，數(shù)據(jù)經(jīng)回歸處理，計(jì)算得回歸方程：y=12.384x-0.0004，r=0.999。2.2單因素實(shí)驗(yàn)2.2.1乙醇濃度取棉花莖4g，50ml30%乙醇為溶劑，25℃下超聲提取兩次，30min/次。再在相同條件下分別以40%,50%,60%,70%,80%,90%乙醇為溶劑提取。過濾，濾液分別用紫外分光光度計(jì)測定吸光度,并計(jì)算出黃酮類化合物含量。2.2.2超聲溫度取棉花莖4g，30%乙醇50ml，分別在25，35，45℃下超聲提取。過濾，濾液分別用紫外分光光度計(jì)測定吸光度,并計(jì)算出黃酮類化合物的含量。2.2.3超聲次數(shù)超聲次數(shù)不同提取效果不同。實(shí)

8、驗(yàn)發(fā)現(xiàn)超聲