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《乙型肝炎病毒感染模型的研究現(xiàn)狀》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、2008年9月中國·天津乙型肝炎病毒感染模型的研究現(xiàn)狀王選舉，黃正明(解放軍第302醫(yī)院藥學(xué)部臨床藥理研究室，北京100039)乙型肝炎病毒(HBV)是一種嚴(yán)重危害人類健康的病毒，由于它的宿主范闈狹窄，有明顯嗜肝性，體外培養(yǎng)斟難，因而使得有關(guān)HBV的研究受到很大限制。如何建芷一種簡(jiǎn)便、有效、穩(wěn)定的HBV感染模型對(duì)于探索其感染機(jī)制，尋找有效的防治方法及開展抗HBV藥物的篩選都具有重要的意義。近年來，隨著分子生物學(xué)、病毒學(xué)和免疫學(xué)等相關(guān)學(xué)科的發(fā)展，關(guān)于HBV感染的體內(nèi)外模型研究有了很大的發(fā)展，建立了多種動(dòng)物及細(xì)胞模型，為HBV的研究提供了十分重要的工具，本文現(xiàn)就近幾年
2、的相關(guān)研究現(xiàn)狀作一綜述。1體外模型1．12．2．15細(xì)胞系統(tǒng)HBV感染有高度的種屬和組織特異性，它只感染人和類人猿，體外培養(yǎng)的人和類人猿原代肝細(xì)胞雖然可以支持HBV的復(fù)制，但細(xì)胞維持時(shí)間不長，難以推廣。多年來人們一直試圖通過組織培養(yǎng)系統(tǒng)來建立HBV的研究模型，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展和分子克隆技術(shù)的應(yīng)用，1986年Selis等用共轉(zhuǎn)染的方法將克隆的HBV—DNA(2個(gè)HBV頭對(duì)尾二聚體，以尾對(duì)尾方向串聯(lián))及含有新霉素抗性基因的質(zhì)粒導(dǎo)人人肝癌細(xì)胞系(HePG一2)中建立了2．2．15細(xì)胞株。這種細(xì)胞株一方面導(dǎo)人了HBV—DNA可表達(dá)傘部病毒標(biāo)志，能長期穩(wěn)定地分泌HBsA
3、g、HBeAg和完整的Dase顆粒，還能產(chǎn)生大量的病毒復(fù)制中間體。另一方面，同時(shí)導(dǎo)人PsvT，使轉(zhuǎn)染細(xì)胞具有新霉素抗性的選擇表性遺傳性，能使其宿主在含有新霉素的類似物G一418的選擇培養(yǎng)基中得以生長。而轉(zhuǎn)染不成功的細(xì)胞由于不具備新霉素抗體的篩選標(biāo)志『而被淘汰。2．2．15細(xì)胞的建立，為HBV—DNA的結(jié)構(gòu)、功能、基因表達(dá)和調(diào)控以及體外抗HBV藥物的初篩提供了有效的模型，在抗HBV藥物研究中有很大的應(yīng)用價(jià)值。關(guān)于2．2．15細(xì)胞是否能夠分泌cccDNA，意見不一，傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為該細(xì)胞株不能分泌cccDNA，但也有人報(bào)道能夠在培養(yǎng)液中檢測(cè)到cccDNA的存在J2】。2．
4、2．15細(xì)胞為上皮樣細(xì)胞形態(tài)，細(xì)胞內(nèi)常有空泡且有聚集生長的現(xiàn)象，體外培養(yǎng)有附壁生長的能力網(wǎng)，實(shí)驗(yàn)證明貼壁是此類細(xì)胞體外增殖的主要條件。但2．2．15細(xì)胞營養(yǎng)要求較高，細(xì)胞培養(yǎng)難度較大，常不易培養(yǎng)成功。另外，該細(xì)胞模型也存在一定的局限性：(1)HBV是整合在宿主細(xì)胞染色體上，復(fù)制方式與自然感染不同，且不能被清除；(2)病毒復(fù)制的水平不能人為改變，復(fù)制水平低；(3)再現(xiàn)了HBV在肝細(xì)胞的復(fù)制和表達(dá)，但脫離了機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)HBV產(chǎn)生影響的環(huán)境，抗HBV藥可分直接抑制病毒藥和通過增強(qiáng)免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)而間接對(duì)HBV產(chǎn)生抑制及清除作用，后者不能通過2．2．15細(xì)胞系為模型作為臨床
5、的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。應(yīng)用2．2．15細(xì)胞模型進(jìn)行的藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)只能反映藥物對(duì)2．2．15細(xì)胞HBV標(biāo)志物的抑制作用，但不能揭示藥物通過對(duì)免疫功能的影響而發(fā)揮間接的抗HBV作用。1．2HBV一桿狀病毒一HepG2系統(tǒng)為克服HBV的細(xì)胞膜屏障，人們借用其他病毒的感染能力，把HBV導(dǎo)人到了靶細(xì)胞。Delaney等報(bào)道了一種抗HBV藥物體外篩選系統(tǒng)，即HBV一桿狀病毒一HepG2系統(tǒng)141。它是利用桿狀病毒AutographaCalifornia將具有復(fù)制能力的HBV基因組導(dǎo)入到HepG2細(xì)胞，可以檢測(cè)到高水平的HBV表達(dá)，包括細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外HBV—DNA和RNA，以及cccDNA
6、和各種HBV抗原。病毒表達(dá)的水平和病毒的感染量(MOI)有量效關(guān)系。該系統(tǒng)可以控制感染的時(shí)間，在病毒復(fù)制期間或之前可對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理。用該系統(tǒng)對(duì)拉米夫定的藥效進(jìn)行評(píng)價(jià)，發(fā)現(xiàn)拉米夫定可以減少細(xì)胞內(nèi)復(fù)制中間體和細(xì)胞外HBV—DNA，而且可以抑制cccDNA的表達(dá)151。但是，桿狀病毒系統(tǒng)也有缺陷161：(1)桿狀病毒進(jìn)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞是通過非特異的內(nèi)涵體攝取而不是受體介導(dǎo)方式；(2)桿狀病毒感染的每個(gè)細(xì)胞內(nèi)有多個(gè)HBV暨第二屆肝病蔫嘉主震言思藁萋鏨差棠委喜蔞論文集暨第二屆肝病治療進(jìn)展與臨床藥學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)，巳入禾拷貝；(3)桿狀病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移限制在一定的種屬，更重要的是
7、不能作為動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的方法。1．3Ad—HBVl．3一HePG2系統(tǒng)：鑒于以上原因，He等17J以腺病毒為載體將1．3倍的HBV轉(zhuǎn)入包裝細(xì)胞293(人胚腎細(xì)胞)，再將包裝好的病毒感染HepG2細(xì)胞，可以產(chǎn)生高水平的HBV表達(dá)，即Ad—HBVl．3一HePG2系統(tǒng)。該系統(tǒng)利用細(xì)菌內(nèi)同源重組法將具有同源性的兩個(gè)質(zhì)粒pAdEasy和pAdTrack—CMV共轉(zhuǎn)化到E．coliBJ5183細(xì)胞，使腺病毒載體和目的基因HBVl．3連為一體。pAdTrack—CMV和環(huán)狀的pAdEasy共轉(zhuǎn)化E．coliBJ5183細(xì)胞后，用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞293(人胚腎細(xì)胞)。用獲得的
8、病毒顆粒重
