荊半夏的懸浮培養(yǎng)

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1、生物工程學(xué)院實驗報告姓名：謝應(yīng)松學(xué)號：2012307040202專業(yè)：生物制藥技術(shù)課程名稱：《植物細(xì)胞學(xué)》指導(dǎo)教師：李先良成績：實驗題目：荊半夏的懸浮培養(yǎng)㈠實驗?zāi)康?、掌握懸浮培養(yǎng)技術(shù)2、掌握無菌植物的獲得步驟㈡實驗儀器與試劑實驗器材：超凈工作臺、光照培養(yǎng)箱、刻度燒杯（1000ml）、小燒杯若干、量筒（1000ml、50ml）、容量瓶（500mL?、250mL）、棕色試劑瓶（500mL、100mL）、藥勺、玻棒、洗耳球、洗瓶、電爐、不銹鋼鑷子、剪刀、解剖刀、酒精燈、無菌吸水紙、一次性手套、記號筆、標(biāo)簽紙，滴管、電子天平（感量為0.0001g）、一般天

2、平（感量為0.1g）、高壓滅菌鍋、pH計（pH試紙），三角燒瓶（100mL）、稱量紙、試劑：荊半夏、NAA、2,4-D、6-BA、瓊脂、蔗糖㈢實驗原理半夏是一種重要的中藥材，具有鎮(zhèn)痛、抗生育、抗腫癌、提高記憶之活性，具有很好的發(fā)展前景。生物堿在半夏的藥理活性中具有重要的作用。半夏生物堿的積累和提取顯得至關(guān)重要，細(xì)胞懸浮培養(yǎng)是一個好的選擇。㈣實驗步驟1、無菌外植體的獲得從田間采挖直徑0.5～1.0cm的半夏塊莖,在流水中沖洗干凈,剝?nèi)ケ砥?置于超凈工作臺上用體積分?jǐn)?shù)70%酒精表面消毒30s,再用體積分?jǐn)?shù)0.1%HgCl2溶液消毒15min,無菌水沖洗6

3、～7次,切成0.5cm×0.5cm×0.5cm的小塊,然后將其接入含0.2mg/L2,42D和3.0mg/L62BA的MS培養(yǎng)基中,于光照培養(yǎng)箱中,培養(yǎng)1～2個月后誘導(dǎo)形成半夏植株。2、培養(yǎng)基的配制：(1)MS+0.2mg/LNAA+0.5mg/L6-BA;(2)MS+0.2mg/LNAA+1.0mg/L6-BA;(3)MS+0.2mg/LNAA+2.0mg/L6-BA;(4)MS+0.5mg/LNAA+0.5mg/L6-BA;(5)MS+0.5mg/LNAA+1.0mg/L6-BA;(6)MS+0.5mg/LNAA+2.0mg/L6-BA。3、接種

4、接種完后，貼上標(biāo)簽，注明姓名、接種日期、培養(yǎng)基名稱和培養(yǎng)材料名稱。整理、清潔超凈工作臺臺面。?4、培養(yǎng)㈤實驗結(jié)論根據(jù)小塊莖在固體培養(yǎng)基上的增殖情況,選用添加0.6mg/L6-BA的1/2MS液體培養(yǎng)基進(jìn)行小塊莖的液體懸浮培養(yǎng)。在此培養(yǎng)基中,未分化的小塊莖不斷生長出許多二級、三級小塊莖。在一個培養(yǎng)周期內(nèi),小塊莖的生長進(jìn)程，轉(zhuǎn)入液體培養(yǎng)基的第1周,小塊莖的生長量幾乎沒有變化,此時為培養(yǎng)的延滯期;到培養(yǎng)的第2周,小塊莖生長量有少量增加,從剛開始接種的30.00g/L增加到了30.38g/L;第2周以后,小塊莖進(jìn)入了快速生長期,到第5周末,生長量已達(dá)到120

5、.56g/L,是初始接種的4.02倍;培養(yǎng)至第6周,小塊莖增長變緩,而此時其顏色已開始變褐,培養(yǎng)基渾濁,表明小塊莖已進(jìn)入生長衰退期。