電化學發(fā)光免疫分析法

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1、電化學發(fā)光免疫分析法Electro-ChemiluminescenceImmunoassay(ECLI)1免疫分析法發(fā)光和化學發(fā)光化學發(fā)光免疫分析法電化學發(fā)光電化學發(fā)光免疫分析法2免疫分析基于抗原和抗體的特異性反應進行檢測的一種手段；免疫標記技術(shù)是將一些既易測定又具有高度敏感性的物質(zhì)標記到特異性抗原或抗體分子上，通過這些標記物的增強放大效應來顯示反應系統(tǒng)中抗原或抗體的性質(zhì)與含量。3免疫學檢測歷史演進放射免疫檢測（興起于20世紀70年代，現(xiàn)仍普遍使用于縣級以上醫(yī)院）；酶聯(lián)免疫檢測（興起于20世紀80年代，各臨床機構(gòu)普遍使用）；以化學

2、發(fā)光為代表的光生物學標記及免疫檢測技術(shù)（20世紀90年代開始推廣使用，產(chǎn)品步入成長期）三個階段。4免疫分析法發(fā)光和化學發(fā)光化學發(fā)光免疫分析法電化學發(fā)光電化學發(fā)光免疫分析法5發(fā)光現(xiàn)象6螢火蟲發(fā)光7深海魚發(fā)光8發(fā)光分類光照發(fā)光:發(fā)光劑經(jīng)短波長入射光照射后進入激發(fā)態(tài)，當回復至基態(tài)時發(fā)出較長波長的可見光。生物發(fā)光：反應底物在熒光素酶的催化下利用ATP產(chǎn)能，生成激發(fā)態(tài)的氧化熒光素，后者在回復到基態(tài)時多余的能量以光子形式放出?；瘜W發(fā)光9化學發(fā)光Chemiluminescence(CL)化學發(fā)光是指在某些特殊的化學反應中，反應的中間體或產(chǎn)物由于

3、吸收了反應釋放的化學能而處于電子激發(fā)態(tài)，當其回到基態(tài)時伴隨產(chǎn)生的光輻射現(xiàn)象。10化學發(fā)光反應包括兩個關(guān)鍵步驟，即化學激發(fā)和發(fā)光?；瘜W發(fā)光反應能級圖11化學發(fā)光分析根據(jù)化學發(fā)光反應在某一時刻的發(fā)光強度或反應的發(fā)光總量來確定反應中相應組分含量的分析方法，稱為化學發(fā)光分析。12化學發(fā)光分析優(yōu)點化學發(fā)光具有熒光的特異性，同時不需要激發(fā)光，就避免了熒光分析中激發(fā)光雜散光的影響有很高的靈敏度，并且不象放射分析那樣存在強烈的環(huán)境污染和健康危害，是一種非常優(yōu)秀的定量分析方法。13化學發(fā)光分析缺點雖然化學發(fā)光具備很高的特異性和很小的干擾，但化學分析

4、本身的不特異性，制約了整個方法的使用。14免疫分析法發(fā)光和化學發(fā)光化學發(fā)光免疫分析法電化學發(fā)光電化學發(fā)光免疫分析法15化學發(fā)光免疫分析chemiluminescenceimmunoassay（CLIA）CLIA是將化學發(fā)光分析和免疫反應相結(jié)合而建立的一種新的免疫分析技術(shù)。這種方法兼有發(fā)光分析的高靈敏度和抗原抗體反應的高度特異性。16化學發(fā)光免疫分析（CLIA）分類按分離方法不同分微粒子化學發(fā)光免疫測定磁顆粒化學發(fā)光免疫測定17化學發(fā)光免疫分析（CLIA）分類按發(fā)光劑不同分為發(fā)光酶免疫測定（chemiluminescenceenzy

5、meimmunoasssay，CLEIA）化學發(fā)光免疫測定技術(shù)（chemiluminescenceimmunoassay，CLIA）電化學發(fā)光免疫測定技術(shù)（electro－chemiluminescenceimmunoassay，ECLI）18免疫分析法發(fā)光和化學發(fā)光化學發(fā)光免疫分析法電化學發(fā)光電化學發(fā)光免疫分析法19電致化學發(fā)光（ECL)電致化學發(fā)光(ECL)是通過在電極上施加一定波形的電壓或電流信號進行電解反應的產(chǎn)物之間或與體系中共存組分反應產(chǎn)生化學發(fā)光的現(xiàn)象。20電致化學發(fā)光（ECL)ECL與CL的差異在于ECL是電啟動發(fā)光

6、反應，而CL是通過化合物混合啟動發(fā)光反應。因此ECL反應易精確控制，具有靈活性。21電化學發(fā)光劑定義：指通過在電極表面進行電化學反應而發(fā)出光的物質(zhì)。特點反應在電極進行化學發(fā)光劑：三聯(lián)毗啶釕電子供體為：三丙胺（TPA）22三聯(lián)毗啶釕分子結(jié)構(gòu)圖23三聯(lián)吡啶釕（[Ru(bpy)3]2+）特點ECL分析中采用[Ru(bpy)3]2+作為標記物，其活化衍生物是[Ru(bpy)3]2+＋N羥基琥珀酸胺酯（NHS），該衍生物具有水溶性，且高度穩(wěn)定，保證電化學發(fā)光反應的高效和穩(wěn)定，而且避免了本底噪聲的干擾。24三聯(lián)吡啶釕（[Ru(bpy)3]2

7、+）特點[Ru(bpy)3]2+衍生物與免疫球蛋白結(jié)合的分子比超過20仍不會影響抗體的可溶性和免疫活性；[Ru(bpy)3]2+分子量小，空間位阻小，即便小分子的核酸也能標記，使檢測的菜單大大豐富，更重要的是為其檢測菜單的開發(fā)前景提供了廣闊空間。25電化學發(fā)光原理圖基態(tài)激發(fā)態(tài)不穩(wěn)定26免疫分析法發(fā)光和化學發(fā)光化學發(fā)光免疫分析法電化學發(fā)光電化學發(fā)光免疫分析法27電化學發(fā)光免疫分析(Electro-ChemiluminescenceImmunoassay,ECLI)ECLI是繼EIA、RIA、FIA、時間分辨熒光免疫技術(shù)（TRFIA）

8、之后的新一代標記免疫測定技術(shù)；ECLI是電化學發(fā)光(ECL)和免疫測定相結(jié)合的產(chǎn)物；ECLI是目前最先進的標記免疫測定技術(shù)之一。28ECLI原理在電極表面由電化學引發(fā)的特異性化學發(fā)光反應，用電化學發(fā)光劑三聯(lián)吡啶釕[Ru(bpy)3]2+標記Ab，通