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《紅 細 胞 血 型 血 清 學 試 驗》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、紅細胞血型血清學試驗安徽省合肥市第一人民醫(yī)院輸血科林正民江建鋒陳玲梁曉瀏IgG抗A（B）測定【原理】血清以巰基乙醇（2-mercaptoethanol,簡稱2-me）處理后，IgM抗體分子裂解為6-7S亞單位。此種亞單位雖然仍保持與抗原結合的能力，但已失去與相應紅細胞凝集的作用。IgG抗體分子則不被2-me滅活，保持與相應紅細胞致敏的血清學特性。IgA抗體分子可部分被滅活（7S亞單體不受影響，9S及11S多聚體被滅活）。【試劑】1、0.2mol/L2-巰基乙醇應用液取巰基乙醇1.6ml以pH7.4PBS（KH
2、2PO41.73g,Na2HPO4·12H2O19.35g,NaCl8g加蒸餾水至100ml）稀釋到100ml，分裝安瓿，每支1ml或2ml,冰箱保存?zhèn)溆谩?、受檢者血清。3、5%A型和B型紅細胞PBS（或生理鹽水）懸液。4、抗人球蛋白血清?！静僮鳌?、吸取受檢者血清0.4ml，加2-me應用液0.4ml，混合，將試管口塞緊，置37℃水浴中2h。2、排列小試管（10mm×60mm）兩排，每排10支，第一排每管各加pH7.4的PBS0.4ml。3、第1排第1管加2-me處理血清0.4ml，混合，吸出0.6ml，
3、移0.2ml至第2排第1管內，其余0.4ml移入第1排第2管內，混合。以此類推，作倍量稀釋至第10管，每管內留有1:2,1:4,…1:1024不同稀釋度的血清各0.2ml。4、第1排每管各加5%A型紅細胞懸液0.2ml，第2排每管各加5%B型紅細胞懸液0.2ml，置37℃水浴溫育1h。5、結果觀察如在前幾管內發(fā)現(xiàn)有紅細胞凝集者，是由于高效價IgG抗A(B)或IgA抗A(B)所引起，稱為“鹽水效價”。6、其余紅細胞未見凝集的試管，再以pH7.4PBS洗滌3次，除去洗滌液，留取壓實紅細胞。7、每管各加pH7.4的
4、PBS2滴，混合。8、每管各取1滴，分別移至另一排小試管中，再各加最適稀釋度抗人球蛋白血清1滴，混合。9、1000r/min離心1min。10、輕輕搖動試管，觀察結果，紅細胞凝集的最高稀釋度的倒數(shù)即為IgG抗A或抗B效價。【附注】1、本法常用于ABO血型IgG抗A或抗B效價的測定，如ABO新生兒溶血病母親血清中IgG抗A(B)的測定。2、二硫蘇糖醇（dithiothreitol,DTT）也可用于滅活IgM抗體，以測定IgG抗體。方法：0.01mol/LDDT(0.77gDTT溶于500ml等滲鹽水)與等量受檢
5、者血清混合，置37℃水浴30min，再以此處理血清進行試驗。DTT的優(yōu)點為無惡臭味，反應快速，但對強抗體滅活效果較差?？骨虻鞍自囼灴骨虻鞍自囼灒╝ntiglobulintest,AGT）又稱Coombs試驗，是檢查不完全抗體的一種很好的方法。將抗球蛋白血清（antiglobulinserum，AGS）加入已致敏的紅細胞鹽水懸液中，紅細胞表面的抗體球蛋白（使其致敏的不完全抗體）與抗球蛋白血清中的抗體發(fā)生特異性反應，使紅細胞發(fā)生凝集?？骨虻鞍籽宄丝梢詼y定紅細胞上的IgG抗體外，還可以測定IgM和IgA，也可以
6、測補體組分（C3、C4）。所謂廣譜AGS即包括抗IgG和抗C3。（一）直接抗球蛋白試驗【原理】利用抗球蛋白血清可與體內已被不完全抗體或補體致敏紅細胞產生凝集反應，用于檢查紅細胞是否已被不完全抗體所致敏，如新生兒溶血?。ㄌ杭t細胞被母親血型抗體致敏）溶血性輸血反應（輸入的不相合紅細胞被受血者不完全抗體致敏）自身免疫性溶血性貧血（患者紅細胞被自身抗體致敏）以及藥物誘導產生的自身抗體（由甲基多巴類藥物、青霉素等所致）。【試劑】1、抗球蛋白血清（廣譜及單價），市售合格產品。2、用不完全抗D致敏的5%Rh(D)陽性紅細
7、胞鹽水懸液供陽性對照用。取3人O型紅細胞，混合，經(jīng)鹽水洗滌后取壓緊的紅細胞，加等量抗D血清，置37℃水浴致敏30min,取出后離心去除上清液，以生理鹽水洗滌3次，最后再用鹽水配成5%紅細胞懸液。3、正常人5%D陽性紅細胞懸液（未致敏），供陰性對照用，除不用抗D血清外，按上法配制?！静僮鳌?、取受檢查紅細胞，以生理鹽水洗滌3次，末次洗滌后，將上層鹽水倒盡，再以濾紙將管口附著的鹽水吸去，配成5%紅細胞鹽水懸液。2、取上述5%受檢者紅細胞鹽水懸液1滴，移入1小試管（10mm×60mm）內，加抗球蛋白血清1滴，混勻。
8、3、陽性對照：用不完全抗D血清致敏的5%D陽性紅細胞懸液1滴加抗球蛋白血清1滴，混勻。4、陰性對照：正常人5%D陽性紅細胞懸液1滴加抗球蛋白血清1滴，混勻。5、受檢者以及陽性、陰性對照管同時以1000r/min離心1min，輕輕側動，觀察結果。6、結果判定如陽性對照管凝集，陰性對照管不凝集，則受檢者紅細胞凝集者為陽性，不凝集者為陰性?！靖阶ⅰ?、標本采集后立即進行試驗，延遲試驗或中途停止可使抗體從細
