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1、HPLC法測(cè)定漢中參葉中人參皂苷Rd含量【摘要】目的:建立HPLC法測(cè)定漢中參葉中人參皂苷Rd的含量。方法:篩選適當(dāng)提取方法,色譜柱:InertsilODS-sp(5μm,4.6mm×150mm);流動(dòng)相:乙腈-水(32:64);柱溫:30℃;流速:1.0ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng):203nm;高效液相色譜儀測(cè)定峰面積。結(jié)果:人參皂苷Rd線性范圍在9～90ug,γ=0.9998,平均回收率為99.77%,RSD為1.67%。表明該法適用于漢中參葉中人參皂苷Rd的含量測(cè)定。結(jié)論:本法準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便?！娟P(guān)鍵詞】漢中參葉;人參皂苷Rd;HPLC【中圖分類(lèi)號(hào)】R284.1【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】
2、1007-8517(2010)18-033-2漢中參葉,即珠子參葉。為五加科人參屬植物珠子參PanaxjaponicusC.A.Mey.var.major(Burk.)C.Y.Wuet5K.M.Feng的干燥地上莖葉。為陜西秦巴山區(qū)民間習(xí)用藥材,具有清熱生津、潤(rùn)喉利咽、安神的功效。主要用于肺熱口渴、喉干舌燥、暑熱生津、頭暈?zāi)垦?、心煥神散疲等的治療。民間多以單葉入茶飲用,歌舞藝人常用來(lái)保護(hù)嗓音,保持體力,解暑。現(xiàn)化學(xué)研究表明,漢中參葉富含多種人參皂苷類(lèi)成分,如人參皂苷Rd、Re、Rg1、Rg2和F2,珠子參苷F1,F2,F3,F4,F5,F6[1-3],此外,尚含多種氨基酸及微量元素[4];
3、藥理研究表明,漢中參葉總皂苷可對(duì)抗二甲苯所致小鼠耳廓腫脹,減少醋酸致小鼠毛細(xì)血管通透性增加,抑制肉芽組織增生;對(duì)熱板引起的疼痛有一定的鎮(zhèn)痛效果;能延長(zhǎng)缺氧條件下小鼠存活時(shí)間[5-6]。為此,本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法建立漢中參葉中人參皂苷Rd的含量,為客觀準(zhǔn)確評(píng)價(jià)漢中參葉藥材質(zhì)量,合理開(kāi)發(fā)利用漢中參葉藥材資源提供科學(xué)依據(jù)。1儀器與材料1.1儀器島津LC-2010AHT高效液相色譜儀;ShimadzuLCsolution工作站;SB-3200D型超聲清洗機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司,180w,40kHz);BP-121S電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)。1.2樣品與試劑漢中參葉采自陜西
4、寧強(qiáng),經(jīng)陜西中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院中藥標(biāo)本館高級(jí)實(shí)驗(yàn)師王繼濤老師鑒定為珠子參PanaxjaponicusC.A.Mey.var.major(Burk.)C.Y.WuetK.M.Feng的干燥地上莖葉。人參皂苷Rd對(duì)照品(中國(guó)固體制劑制造技術(shù)國(guó)家工程研究中心提供);乙腈為色譜純(SKChemicals公司),水為娃哈哈純凈水,其他試劑均為分析純。2方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱:Inertsil5ODS-sp(5μm,4.6mm×150mm);流動(dòng)相:乙腈:水(32:64),檢測(cè)波長(zhǎng):203nm,流速:1.0ml/min;進(jìn)樣量:10μl;柱溫:30℃;理論板數(shù)按人參皂苷Rd峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。
5、人參皂苷Rd對(duì)照品和供試品HPLC圖譜見(jiàn)圖1、圖2。2.2對(duì)照品溶液配制精密稱(chēng)取人參皂苷Rd對(duì)照品4.5mg,置于10ml量瓶中,加甲醇溶解、定容,搖勻,待用。2.3供試品溶液的配制取參葉粉末2g,精密稱(chēng)定,置錐形瓶中,加甲醇50ml超聲處理30min,過(guò)濾,濾液蒸干,加水分散,石油醚反復(fù)萃取,每次20ml,棄去石油醚層,再用水飽和正丁醇萃取3次(分別為20、15、15ml),合并正丁醇層,水浴蒸干,殘?jiān)蒙倭考状既芙?、并轉(zhuǎn)移定容至5ml量瓶中,備用。2.4線性關(guān)系考察分別精密吸取人參皂苷Rd對(duì)照品溶液2、5、10、15、20ul注入高效液相色譜儀,按上述色譜條件測(cè)定,以人參皂苷Rd進(jìn)樣量
6、(ug)為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程為Y=126191X-39983,r=0.9998。結(jié)果表明,人參皂苷Rd在9～90ug范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.5精密度考察取同一供試品溶液,照“2.1”項(xiàng)下色譜條件,重復(fù)進(jìn)樣5次,每次10ul,測(cè)得人參皂苷Rd峰面積的RSD為1.7%,表明本方法精密度良好。2.6穩(wěn)定性考察取供試品溶液分別于0、2、4、8、12、24h進(jìn)樣,每次10ul,記錄峰面積,計(jì)算人參皂苷Rd的RSD為1.8%,表明供試品溶液在24h穩(wěn)定。52.7重復(fù)性考察取同一批樣品5份,按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液,每份進(jìn)樣10ul,測(cè)得人參皂苷Rd含量的RSD為0.
7、4%,表明本方法重復(fù)性良好。2.8加樣回收率試驗(yàn)取已知含量的漢中參葉粉末約0.1g,共5份,精密稱(chēng)定,分別準(zhǔn)確加入人參皂苷Rd對(duì)照品,按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液,每份進(jìn)樣10ul測(cè)定人參皂苷Rd的峰面積,計(jì)算平均回收率99.77%,RSD=1.67%(見(jiàn)表1)。2.9樣品測(cè)定精密稱(chēng)取漢中參葉粉末2.0g,按照供試品溶液制備方法制備樣品溶液,進(jìn)樣10ul,測(cè)定峰面積,計(jì)算含量,結(jié)果表明,漢中參葉中人參皂苷Rd含量為0.
