細(xì)菌和霉菌總數(shù)的檢驗(yàn)

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1、1　范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了化妝品微生物學(xué)細(xì)菌和霉菌總數(shù)的檢驗(yàn)。本標(biāo)準(zhǔn)適用于化妝品細(xì)菌和霉菌總數(shù)的檢測(cè)。2　規(guī)范性引用文件GB7916化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB/T7918化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法QB/T1684-1993化妝品檢驗(yàn)規(guī)則3　一般規(guī)定細(xì)菌總數(shù)是指1g或1ml化妝品中所含的活菌數(shù)量。測(cè)定細(xì)菌總數(shù)和霉菌總數(shù)可用來(lái)判明化妝品被微生物污染的程度，以及生產(chǎn)所用的原料、工具設(shè)備、工藝流程、操作者的衛(wèi)生狀況，是對(duì)化妝品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)的綜合依據(jù)。3.1?方法提要：本標(biāo)準(zhǔn)采用標(biāo)準(zhǔn)平板計(jì)數(shù)法?；瘖y品中污染的微生物種類不同，每種微生物都有它一定的生理物理特性，培養(yǎng)時(shí)對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間

2、、pH值、需氧性質(zhì)等均有所不同。在實(shí)際工作中，不可能做到滿足所有菌種的要求，因此所測(cè)定的結(jié)果，只包括在本方法所使用的條件下（在卵磷脂、吐溫-80營(yíng)養(yǎng)瓊脂上，于37℃培養(yǎng)48h；在虎紅瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)72h)生長(zhǎng)的一群嗜中溫的需氧及兼性厭氧的微生物總數(shù)。3.2?儀器3.2.1?250ml錐形瓶。3.2.2?電子天平、量筒。3.2.3?壓力蒸汽滅菌鍋。3.2.4?移液管。3.2.5?滅菌培養(yǎng)皿：直徑9cm。3.2.6?酒精燈。3.2.7恒溫培養(yǎng)箱。3.2.8?放大鏡。3.3?培養(yǎng)基和試劑的制備3.3.1?生理鹽水：氯化鈉??????????????????????8.5g蒸餾

3、水??????????????????????1000ml溶解后，分裝到加適量玻璃珠的250ml錐形瓶?jī)?nèi)，每瓶90ml，經(jīng)121℃(0.11?MPa)20min高溫高壓滅菌。3.3.2?卵磷脂、吐溫80-營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：制法：稱取51g粉狀卵磷脂、吐溫80-營(yíng)養(yǎng)瓊脂成品培養(yǎng)基加入到1000ml純水中混合,溶解均勻后分裝,經(jīng)121℃(0.11?MPa)20min高溫高壓滅菌，儲(chǔ)存于冷暗處備用。3.3.3虎紅瓊脂培養(yǎng)基：制法：稱取31.6g粉狀虎紅瓊脂成品培養(yǎng)基加入到1000ml純水中混合,溶解均勻后分裝,經(jīng)121℃(0.11?MPa)20min高溫高壓滅菌，儲(chǔ)存于冷暗處備用

4、。4倒培養(yǎng)皿操作步驟：4.1按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求檢測(cè)細(xì)菌總數(shù)和霉菌總數(shù).倒培養(yǎng)皿前供檢樣品的采集、保存和樣品制備按《微生物檢驗(yàn)總則》要求進(jìn)行操作。4.1.1細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)：用移液管吸取1：10稀釋的檢樣1ml，注入到一個(gè)滅菌培養(yǎng)皿內(nèi)；將熔化并冷至45～50℃的卵磷脂、吐溫80-營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾注于培養(yǎng)皿內(nèi)，每皿約15ml；隨即水平轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使樣品與培養(yǎng)基充分混合均勻，待培養(yǎng)基凝固后，翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿，置37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h。4.1.2霉菌總數(shù)檢測(cè)：用移液管吸取1:10稀釋的檢樣1ml，注入到一個(gè)滅菌培養(yǎng)皿內(nèi)；將熔化并冷至45～50℃的虎紅瓊脂培養(yǎng)基傾注于培養(yǎng)皿內(nèi)，每皿約15ml；

5、隨即水平轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使樣品與培養(yǎng)基充分混合均勻，待培養(yǎng)基凝固后，翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿，置25℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)72h。5菌落計(jì)數(shù)方法：先用肉眼觀察，點(diǎn)數(shù)菌落數(shù)，然后再用放大5～10倍的放大鏡檢查，以防遺漏。記下各培養(yǎng)皿的菌落數(shù)后，求出同一稀釋度各培養(yǎng)皿生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)；若培養(yǎng)皿中有連成片狀的菌落或花點(diǎn)樣菌落蔓延生長(zhǎng)時(shí)，該培養(yǎng)皿不宜計(jì)數(shù)；若片狀菌落不到培養(yǎng)皿中的一半，而其余一半中菌落數(shù)分布又很均勻，則可將此半個(gè)培養(yǎng)皿菌落計(jì)數(shù)后乘2，以代表全皿菌落數(shù)。6?菌落計(jì)數(shù)原則及報(bào)告方法：6.1?首先選取平均菌落數(shù)在30～300之間的培養(yǎng)皿，作為菌落總數(shù)測(cè)定的范圍。當(dāng)只有一個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)符合此

6、范圍時(shí)，即以該培養(yǎng)皿菌落數(shù)乘其稀釋倍數(shù)（見(jiàn)表中例１）6.2?若有兩個(gè)稀釋度，其平均菌落數(shù)均在30～300個(gè)之間，則應(yīng)求出兩者菌落總數(shù)之比值來(lái)決定。若其比值小于或等于2應(yīng)報(bào)告其平均數(shù)，若大于2則報(bào)告其中較小的菌落數(shù)(見(jiàn)表中例2例3)。6.3?若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300個(gè)，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(見(jiàn)表中例4)。6.4?若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均少于30個(gè)，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(見(jiàn)表中例5)。6.5?若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30～300個(gè)之間，其中一個(gè)稀釋度大于300個(gè)，而相鄰的另一稀釋度小于30個(gè)時(shí)，則以接近3

7、0或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(見(jiàn)表中例6)。6.6?若所有的稀釋度均無(wú)菌生長(zhǎng)，報(bào)告數(shù)為每克或每毫升小于10個(gè)。6.7?菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告，菌落數(shù)在10以內(nèi)時(shí)，按實(shí)有數(shù)值報(bào)告之，大于100時(shí)，采用二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，應(yīng)以四舍五入法計(jì)算。為了縮短數(shù)字后面零的個(gè)數(shù)，可用10的指數(shù)來(lái)表示(見(jiàn)下表報(bào)告方式欄)。在報(bào)告菌落數(shù)為“不可計(jì)”時(shí)，應(yīng)注明樣品的稀釋度。細(xì)菌計(jì)數(shù)結(jié)果及報(bào)告方法：例次不同稀釋度的平均菌落數(shù)10-1?10-2?10-3兩稀釋度菌數(shù)之比菌落總數(shù)個(gè)/g或個(gè)/ml報(bào)告方式個(gè)/g或個(gè)/ml11365?