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1、（一）高壓恒流泵的維護(hù)注意事項泵的密封圈是最易磨損的部件，密封圈的損壞可引起系統(tǒng)的許多故障，要注意保養(yǎng)和定期更換。應(yīng)采取下列措施以延長使用壽命：絕對不允許在沒有流動相的或流動相還沒有進(jìn)入泵頭的情況下啟動泵而造成柱塞桿的干磨。每天使用后應(yīng)將整個系統(tǒng)管路中的緩沖液體沖洗干凈，防止鹽沉積，整個管路要浸在無緩沖的溶液或有機溶劑中。長期不用也要定期開泵沖洗整個管路。要用HPLC級試劑輸液管前端要用燒結(jié)不銹鋼沉子過濾流動相。要注意防止管路阻塞造成壓力過高而損壞儀器。壓力下限應(yīng)設(shè)置在0.5~1MPa，以防止儲液器中的流動相被抽干或嚴(yán)重
2、滲漏而引起柱塞的干磨有柱后清洗功能的高壓恒流泵還要注意保持清洗液，否則將失去柱后清洗效果。(二)流動相使用的注意事項必須使用HPLC級或相當(dāng)于該級別的流動相，并要先經(jīng)0.45μm薄膜過濾。過濾后的流動相必須經(jīng)過充分脫氣，以除去其中溶解的氣體（如02），如不脫氣易產(chǎn)生氣泡，增加基線噪聲，造成靈敏度下降，甚至無法分析。幾種脫氣方法比較：1、氦氣脫氣法：利用液體中氦氣的溶解度比空氣低，連續(xù)吹氦脫氣，效果較好但成本高。2、加熱回流法：效果較好，但操作復(fù)雜，且有毒性揮發(fā)污染。3、抽真空脫氣法：易抽走有機相4、超聲脫氣法：一種較為常
3、見的脫氣法。流動相放在超聲波容器中，用超聲波震蕩10~15分鐘，此法效果并不太好但操作簡單。如果管路中使用peek樹脂部件，請不要使用下列流動相：濃硫酸、濃硝酸、二氯乙酸、丙酮、四氫呋喃、二氯甲烷、氯仿和二甲基亞砜特別注意HPLC使用過后的系統(tǒng)清洗：含有緩沖鹽溶液的流動相的清洗方法：1、先用100%的純水沖洗，打開排放閥，用3~5ml/min的流量，洗二十分鐘左右后停泵。此舉主要是針對吸液系統(tǒng)、泵頭、進(jìn)出口單向閥等體積較大的空間的清洗2、再用5：95的甲醇/水清洗整個系統(tǒng)，關(guān)閉排放閥，用1ml/min的流量，洗30~60
4、分鐘后停泵。此舉主要是用水清洗整個系統(tǒng)中的鹽，用5%的甲醇主要是為了保護(hù)色譜柱。3、最后用100%的甲醇清洗整個系統(tǒng)，用1ml/min的流量，洗2分鐘左右，然后關(guān)機。如果流動相中不含鹽，則使用上述第三步清洗即可。(三)流動相的更換在分析過程中，有時需要更換流動相進(jìn)行分析。一定要注意前一種使用的流動相和所更換的流動相是不是能夠相溶。如果前一種使用的流動相和所更換的流動相不能夠相溶，那您就要特別注意了。要采用一種與這二種需更換的流動相都能相溶的流動相進(jìn)行過濾、清洗。較為常用的過濾流動相為異丙醇，但實際操作中要看具體情況而定，
5、原則就是采用與這二種需更換的流動相都能相溶的流動相。一般清洗時間為30~40分鐘，直至系統(tǒng)完全穩(wěn)定。如不進(jìn)行以上“特別注意”上述步驟的操作，將會導(dǎo)致系統(tǒng)管路阻塞。嚴(yán)重時將引起流通池污染堵塞，不得不更換流通池。用戶就要承擔(dān)不必要的損失了。儲液器的注意事項：保持流動相儲液器的清潔是保證儀器正常使用的關(guān)鍵。要使用HPLC級的溶劑，對試劑含有緩沖鹽及非HPLC級的流動相一定要用0.45μm過濾器除區(qū)去其中的微量物質(zhì)。儀操作步驟1）、過濾流動相，根據(jù)需要選擇不同的濾膜。2）、對抽濾后的流動相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。3）、打開液
6、相色譜工作站（包括計算機軟件和色譜儀），連接好流動相管道，連接檢測系統(tǒng)。4）、進(jìn)入液相色譜儀控制界面主菜單，點擊manual，進(jìn)入手動菜單。5）、有一段時間沒用，或者換了新的流動相，需要先沖洗泵和進(jìn)樣閥。沖洗泵，直接在泵的出水口，用針頭抽取。沖洗進(jìn)樣閥，需要在manual菜單下，先點擊purge，再點擊start，沖洗時速度不要超過10ml/min。6）、調(diào)節(jié)流量，初次使用新的流動相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過2000。點擊injure，選用合適的流速，點擊on，走基線，觀察基線的情況。7）、設(shè)計
7、走樣方法。點擊file，選取se-lectusersａndmethods，可以選取現(xiàn)有的各種走樣方法。若需建立一個新的方法，點擊newmethod。選取需要的配件，包括進(jìn)樣閥，泵，檢測器等，根據(jù)需要而不同。選完后，點擊protocol。一個完整的走樣方法需要包括：a.進(jìn)樣前的穩(wěn)流，一般2-5分鐘；b.基線歸零；c.進(jìn)樣閥的loading-inject轉(zhuǎn)換；d.走樣時間，隨不同的樣品而不同。8）、進(jìn)樣和進(jìn)樣后操作。選定走樣方法，點擊start。進(jìn)樣，所有的樣品均需過濾。方法走完后，點擊postrun，可記錄數(shù)據(jù)和做標(biāo)記等。
8、全部樣品走完后，再用上面的方法走一段基線，洗掉剩余物。9）、關(guān)液相色譜儀時，先關(guān)計算機，再關(guān)液相色譜。10）、填寫登記本，由負(fù)責(zé)人簽字。注意事項：1）、流動相均需色譜純度，水用20M的去離子水。脫氣后的流動相要小心振動盡量不引起氣泡。2）、柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要讓液體過柱子。3）、所有過柱子的液體均
