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《大麥幼胚農(nóng)桿菌介導》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、1基金項目：甘肅省農(nóng)牧廳生物技術(shù)專項“啤酒大麥籽粒蛋白質(zhì)表達的遺傳調(diào)控及種質(zhì)創(chuàng)新”（GNSW-2006-05）作者簡介：李靜雯(1979-)，女，碩士，助理研究員，從事基因工程在作物育種中的應(yīng)用研究。E-mail：lj-lg614@!63.com;Tel：13519311435（請勿公開）*通訊作者：張正英，副研究員，從事農(nóng)業(yè)生物技術(shù)研究。通訊地址：蘭州市安寧區(qū)農(nóng)科院新村1號。E-mail：kegc8@sina.com根癌農(nóng)桿菌介導的大麥幼胚遺傳轉(zhuǎn)化影響因素研究李靜雯，張正英*(甘肅省農(nóng)業(yè)科學院生物技術(shù)研究所，甘肅蘭州73
2、0070)摘要：為建立和優(yōu)化根癌農(nóng)桿菌介導的大麥遺傳轉(zhuǎn)化體系，以大麥幼胚為轉(zhuǎn)化受體，研究了根癌農(nóng)桿菌介導法轉(zhuǎn)化大麥的主要影響因素。結(jié)果表明，以gus基因瞬時表達率、抗性愈傷組織誘導率為轉(zhuǎn)化指標，篩選出了對大麥幼胚感染力比較強的農(nóng)桿菌菌株EHA105，以及高敏感受體基因型甘啤4號和秀81-47等。實驗結(jié)果還表明，預培養(yǎng)1d的大麥幼胚具有較高的瞬時表達率（91%），是較好的轉(zhuǎn)化受體。菌液侵染濃度OD600=0.5，侵染時間為30min時轉(zhuǎn)化效率最高。在此基礎(chǔ)上，侵染后幼胚與農(nóng)桿菌采用液體共培養(yǎng)方式可明顯提高轉(zhuǎn)化效率，gus基因
3、瞬時表達率最高可達90%。在優(yōu)化條件下，轉(zhuǎn)化約30d后抗選擇劑潮霉素的愈傷組織占受體組織總數(shù)的34.2%。關(guān)鍵詞：大麥；幼胚；根癌農(nóng)桿菌；遺傳轉(zhuǎn)化FactorInfluencingTransformationofBarley(HordeumvulgateL.)ImmatureEmbryosMediatedbyAgrobacteriumtumefaciensLiJing-wen,Zhangzheng-ying*(BiotechnologyResearchInstitute,GansuAcademyofAgricultural
4、Sciences,Gansu,Lanzhou,730070)Abstract:ToestablishandoptimizebarleytransformationsystembyAgrobacterium-mediated,immatureembryoswereusedastargetmaterials.ImportantfactorsthatinfluenceAgrobacterium-mediatedtransformationofbarleywereinvestigated.Theresultsshowedthat,
5、usingtransientGUSexpression,thefrequencyofresistantcalliasacriteria,OnehighlyinfectiousAgrobacteriumtumefaciensstrainstobarleyandsomehighlysensitivebarleyacceptorswereob-tained.Thebarleyimmatureembryoswerepre-culturedfor1day,andusingtheCelldensityofOD600=0.5and30m
6、inutestoinoculateimmatureembryos,whichwasoptimalconditionsforAgrobacterium-mediatedtransformationofbarleyimmatureembryos.Undertheseoptimalconditions,hygromycinresistantcalliwas34.2%ofoftotalexplantsinfectedafterabout30days.Keywords:Barley;Immatureembryo;Aarobacter
7、iumtumefaciens;Genetictransformation禾谷類作物的遺傳轉(zhuǎn)化現(xiàn)已廣泛用于改良作物品質(zhì)，也是功能基因組學研究的有力手段[1]11。大麥作為世界上第四大糧食作物在全球100多個國家廣泛種植。除了其自身的重要研究價值，大麥（二倍體）也可作為研究其他遺傳背景更為復雜的六倍體禾谷類作物（如小麥）的模式作物。因此建立一個高效的大麥遺傳轉(zhuǎn)化體系是很有必要的。大麥的遺傳轉(zhuǎn)化始于20世紀90年代。1994年Wan等利用基因槍介導法獲得了世界上第一例可育大麥轉(zhuǎn)基因植株[2]。1997年Tingay等首次采用農(nóng)桿
8、菌介導法將外源基因?qū)氪篼溣着卟⒊晒Λ@得了大麥轉(zhuǎn)基因植株[3]。此后基于改進大麥遺傳轉(zhuǎn)化體系的大量研究逐步開展[4-5]。雖然以小孢子或子房做為基因轉(zhuǎn)化受體的大麥轉(zhuǎn)基因蔚然興起[6-7]，但是獲得較高的遺傳轉(zhuǎn)化效率，幼胚仍然是首選的轉(zhuǎn)化受體[8]。與基因槍介導法相比，農(nóng)桿菌介導法具有操作簡單、成本低、轉(zhuǎn)
