he石蠟切片步驟-使用

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1、石蠟切片制作一、蘇木精-伊紅對染法一、器材及試劑：1.器材：切片刀，切片機，恒溫箱，蠟杯，酒精燈，解剖刀，解剖剪，解剖盤，培養(yǎng)皿，鑷子，單面刀片，毛筆，包埋盒，染色缸，蓋玻片，載玻片，玻片盤，樹膠，樹膠瓶，顯微鏡，溫度計，臉盆，水浴鍋。切片機，切片刀，溫臺，恒溫箱，解剖刀，鑷子，剪刀，解剖針，單面刀片，小臺木，灑精燈，包埋紙盒，染色缸，燒杯，水盆，熔蠟爐，蠟杯。2．試劑：中性福爾馬林固定液、各種濃度的酒精、二甲苯、石蠟、蜂蠟、蘇木精染液，1%伊紅酒精溶液，1%鹽酸酒精溶液，甘油蛋白粘片劑，中性樹膠。卡諾（Carnoy）固定液，埃利希蘇木精染液，1%伊紅酒精溶液，1%鹽酸乙醇液

2、，各級酒精（30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%），二甲苯，甘油蛋白粘片劑，中性樹膠。3.材料：鼠肝、腎、心肌、骨骼肌或其他組織、大豆或小麥、綠豆、洋蔥、大蒜、蠶豆的根、莖、葉等。二、實驗原理：石蠟切片是最基本的切片技術(shù)，冰凍切片和超薄切片等都是在石蠟切片基礎(chǔ)上發(fā)展起來的。蘇木素與伊紅對比染色法（簡稱H.E.對染法）是組織切片最常用的染色方法。這種方法適用范圍廣泛，對組織細(xì)胞的各種成分都可著色，便于全面觀察組織構(gòu)造，而且適用于各種固定液固定的材料，染色后不易褪色可長期保存。經(jīng)過HE染色，細(xì)胞核被蘇木素染成藍(lán)紫色，細(xì)胞質(zhì)被伊紅染色呈粉紅色。三、試劑配法：1．

3、中性甲醛固定液：甲醛（37%-40%，市售，本所購買即為此濃度）100mL磷酸氫二鈉6.5磷酸二氫鉀（鈉）4g雙蒸水900mL2．蘇木精、伊紅染色液為碧云天產(chǎn)品3．1%鹽酸乙醇液鹽酸1份70%酒精100份4．甘油蛋白貼片劑：蛋白50ml甘油50ml水楊酸鈉（防腐劑）1g配制時將雞蛋一個打破入碗或杯中，去蛋黃留下蛋白，用玻棒調(diào)打成雪花狀泡沫，然后用粗紙或雙層紗布過濾到量筒中，經(jīng)數(shù)小時或一夜，即可濾出透明蛋白液。此時在其中再加等量的甘油，稍稍振搖使兩者混合。最后加入防腐劑（水楊酸鈉）作防腐用?？杀４鎺讉€月。四、實驗步驟：1．取材頸椎脫臼法處死小鼠，打開腹腔，剪取肝組織（或其他組織

4、）。切取的組織塊不宜太大，以利于固定劑穿透，通常以5mm×5mm×2mm或10mm×10mm×2mm為宜。取下所需要的肝組織，切成一小塊2－3mm厚。注意事項：（1）取材動作要迅速，不宜作太久的拖延以免組織細(xì)胞的成分、結(jié)構(gòu)等發(fā)生變化。（2）切片材料應(yīng)根據(jù)需要觀察的部位進(jìn)行選擇，盡可能不要損傷所需要的部分。2．固定將切好的肝組織用生理鹽水組織洗一下，立即投入中性福爾馬林固定液中固定，固定30－50min。注意事項：（1）一般固定液，都以新配為好，配好后應(yīng)貯存在陰涼處，不宜放在日光下，以免引起化學(xué)變化，失去固定作用。（2）有些混合固定液的成份之間會發(fā)生氧化還原作用，一定要在使用前

5、才混合，如果混合太早，固定時就沒有作用了。（3）固定材料時，固定液必須充足，一般為材料塊的20~30倍，有些水分多的材料，中間應(yīng)更換1-2次新液。（4）材料固定完畢后，保存于嚴(yán)密緊塞或加蓋的容器里，同時在容器外上標(biāo)簽，并隨同材料在溶液中投入相應(yīng)的標(biāo)簽，以免相互混淆。標(biāo)簽上注明固定液、材料來源、日期等。標(biāo)簽上的文字，應(yīng)用黑色鉛筆或繪圖黑墨水書寫。3.洗滌材料經(jīng)固定后,流水沖洗，數(shù)小時或過夜。4.脫水材料依次經(jīng)70%、80%、90%各級乙醇溶液脫水，各30min，再放入95%、100%各2次，每次20min。各注意事項：（1）脫水必須在有蓋的玻璃品中進(jìn)行，防止吸收空氣中的水分。（

6、2）在更換高一級的脫水劑時，最好不要移動材料以免損壞，可用吸管吸出器皿中的脫水劑，再用吸水吸盡器皿內(nèi)剩余液，然后于皿中加入高一級脫水劑。（3）在低濃度酒精中，每級停留不宜太長，否則易使組織變軟，助長材料的解體。（4）在高濃度或純酒精中，每級停留的時間也不宜太長，否則會使組織變脆，影響切片。（5）如需過夜，應(yīng)停留在70%酒精中。（6）脫水必須徹底，否則不易透明，甚至使透明劑內(nèi)出現(xiàn)白色混濁現(xiàn)象5．透明純酒精、二甲苯等量混合液15min，二甲苯Ⅰ15min、Ⅱ15min（至透明為止）。由于乙醇與石蠟不相溶，而二甲苯既能溶于乙醇又能溶于石蠟，所以脫水后還要經(jīng)過二甲苯以過渡。當(dāng)組織中全

7、部被二甲苯占有時，光線可以透過，組織呈現(xiàn)出不同程度的透明狀態(tài)。透明注意事項（1）使用透明劑時，要隨時蓋緊蓋子，以免空氣中的水分進(jìn)入。（2）更換每級透明劑，動作要迅速，一方面為了不使材料塊干涸，另一方面能避免吸收濕氣。（3）在透明過程中，如果材料周圍出現(xiàn)白色霧狀，說明材料中的水未被脫凈，應(yīng)退回純酒精中重新脫水，然后再透明。6．透蠟放入二甲苯和石蠟各半的混合液15min（有嗎？），再放入石蠟Ⅰ、石蠟Ⅱ透蠟各50-60分鐘。透蠟的目的是除去組織中的透明劑（如二甲苯等），使石蠟滲透到組織內(nèi)部達(dá)到飽和程度以便包埋