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1、金線蓮組培快繁技術研究【摘要】? 目的建立金線蓮快繁體系。方法以莖段為外植體，開展了莖段不同部位、培養(yǎng)基、激素、有機物和活性炭對不定芽增殖、幼苗生長的影響研究，并進行了移栽試驗。結果外植體以不含頂芽和長根的中間段莖節(jié)為好；不定芽增殖最佳培養(yǎng)基配方為MS（或B5）+BA3.0mg/L+NAA0.5～1.0mg/L，兩個月增殖倍數(shù)達5.0以上；壯苗最適培養(yǎng)基為1/2MS＋NAA3.0mg/L＋6-BA0.5mg/L＋香蕉提取物20%（或椰子汁20%）；試管苗移栽適宜的基質為菜園土1份＋2～3mm粗砂2份（或1份）＋木屑1份（或2份）
2、，3個月成活率均達100%，且生長良好。結論采用上述方法，能實現(xiàn)金線蓮幼苗的快速繁殖?！ 娟P鍵詞】?金線蓮；快速繁殖；增殖；生長；移栽 金線蓮Anoectochilusroxburghii（wall.）lindl為蘭科開唇蘭屬多年生草本，別名金蠶、金線蘭、金線虎頭蕉等，是我國傳統(tǒng)珍貴藥材，素有“金草”“神藥”“烏人參”等美稱，在民間應用范圍較廣，廣泛應用于風濕性關節(jié)炎、高血壓病、糖尿病、腎病等疑難雜癥的治療和強身健體、病后體虛恢復等方面，在浙江、福建、臺灣等省和東南亞地區(qū)被視為珍稀名貴藥材，特別在臺灣省更是備受青睞，被稱為“藥中
3、之王”〔1，2〕。??? 金線蓮種子微小，由未成熟的胚及數(shù)層種皮細胞構成，自然萌發(fā)率和繁殖率低，目前市場上貨源主要來自于野生采挖，產品一直處于供不應求的狀況。近年來，隨著對其藥效學和臨床應用研究的深入，對金線蓮藥用價值的認識進一步提高，其市場貨源緊缺的狀況更為嚴峻，野生資源也不斷遭到破壞性采挖，以致于處于瀕臨滅絕之地。本研究旨在采用組織培養(yǎng)技術，解決金線蓮種苗來源，加快人工栽培，以保護金線蓮野生資源、穩(wěn)定市場供應?，F(xiàn)將有關實驗結果如下?！ ??材料與方法 1.1?材料?無菌繁殖體系的建立為浙江金線蓮野生種源，其它實驗為繼代培養(yǎng)
4、的不定芽及無根幼苗莖段。 1.2? 無菌繁殖體系的建立 取生長健壯、無病蟲害的植株，去葉后放入低濃度的洗衣粉水中漂洗3～5min，然后用流水沖洗30min。在超靜工作臺前，用75%酒精濕潤5～6s，放入0.1%的HgCl溶液滅菌12～13min，用無菌水沖洗5～6次。將消毒好的莖按上段（具莖尖）、中段和下段（匍匐莖段）切成長約1.5～2cm，帶有1～2個節(jié)間的小段，分別接種于MS+6－BA4.0mg/L+NAA0.4mg/L培養(yǎng)基上，pH5.6，蔗糖2.5%，瓊脂0.7%。培養(yǎng)條件為：溫度(25±2）℃，光照時間12h/d，光照
5、強度1500～2000lx?！ ?.3?不定芽誘導 1.3.1?基本培養(yǎng)基對不定芽誘導的影響 采用單因素實驗，培養(yǎng)基選用MS（Murashige-Skoog）〔3〕，1/2MS（大量元素減半，其他成分不變），VW(Vacin&Went)，B5（Gamborg·Miller&Ojima）和KC(KnudsonC)等5種，分別添加6－BA4.0mg/L，NAA1.0mg/L。 1.3.2?激素對不定芽誘導的影響 以MS為基本培養(yǎng)基，添加不同種類及濃度的細胞分裂素和生長素。??? 上述實驗選取無菌健壯植株，切取長約1～1.5cm，
6、帶有一個節(jié)間的莖中段，每處理接10個莖節(jié)，重復3次。培養(yǎng)期間定時觀察不定芽生長情況，培養(yǎng)60d后統(tǒng)計不定芽數(shù)。其它條件同實驗“1.2”項?！ ?.4?壯苗培養(yǎng) 1.4.1?激素對幼苗生長和發(fā)根的影響 以1/2MS為基本培養(yǎng)基，NAA設1～5mg/L5個處理，6－BA設0.5，1.0和1.5mg/L3個處理，共15個處理。 1.4.2?添加物對幼苗生長和發(fā)根的影響以1/2MS＋NAA2.0mg/L＋6－BA0.5mg/L為基本培養(yǎng)，考察馬鈴薯提取物、香蕉提取物、蘋果提取物、椰子汁等4種天然有機物和活性炭對金線蓮幼苗生長的影響。?
7、?? 上述每種培養(yǎng)基均接入經增殖培養(yǎng)高約3cm，具3～4節(jié)間、有1～2片的無根幼苗，每處理接種接無根幼苗10株，重復3次。培養(yǎng)后每隔15d觀察生長情況1次，至3個月考察每株凈增加的葉片數(shù)、重量及發(fā)根數(shù)，并進行數(shù)理統(tǒng)計分析?！ ?.5?移栽?選苗高約6～8cm，莖基直徑約2mm，叢生根有2～3條的試管苗，煉苗4d后，洗凈附著在植株上的培養(yǎng)基，并晾干洗滌水后移人直徑為15cm，裝有不同基質的土盆中，考察不同基質對金線蓮試管苗成活率的影響。移栽前，實驗基質均用45%多菌靈可濕性粉劑800倍溶液澆透消毒。實驗條件為遮蔭度80%的蔭棚，保
8、持空氣相對濕度的80%～90%。如發(fā)現(xiàn)有病死植株，及時拔除。每處理5盆，每盆種5株，重復3次，移栽3個月后考察成活株數(shù)，并進行數(shù)理統(tǒng)計分析?！ ??結果 2.1? 無菌繁殖體系的建立?實驗表明，外植體莖段的分化程度對誘導結果存在一定的影響。從表1
