基因工程和基因重組

《基因工程和基因重組》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。

1、第十四章基因重組與基因工程內(nèi)容提要：細(xì)菌的基因轉(zhuǎn)移包括接合作用、轉(zhuǎn)化作用、轉(zhuǎn)導(dǎo)作用等。當(dāng)細(xì)胞與細(xì)胞或細(xì)菌通過(guò)菌毛相互接觸時(shí)，質(zhì)粒DNA從一個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至另一個(gè)細(xì)胞，這種類(lèi)型的DNA轉(zhuǎn)移稱(chēng)為接合作用。通過(guò)自動(dòng)獲取或人為的供給外源DNA，使細(xì)胞或培養(yǎng)的受體細(xì)胞獲得新的遺傳表型，這就是轉(zhuǎn)化作用。由病毒攜帶將宿主DNA片段從一個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至另一細(xì)胞的現(xiàn)象或機(jī)制，稱(chēng)為轉(zhuǎn)導(dǎo)作用。在接合、轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)或轉(zhuǎn)座過(guò)程中，不同DNA分子間發(fā)生的共價(jià)連接即為重組。重組DNA技術(shù)是在人們對(duì)自然界基因轉(zhuǎn)移和重組的認(rèn)識(shí)基礎(chǔ)上創(chuàng)立的新技術(shù)。為研究基因的結(jié)構(gòu)與功能，從構(gòu)建的基因

2、組DNA文庫(kù)或cDNA文庫(kù)分離、擴(kuò)增某一感興趣的基因就是基因克隆或分子克隆，又稱(chēng)重組DNA技術(shù)。一個(gè)完整的基因克隆過(guò)程應(yīng)包括：1．分，即目的基因的獲取及基因載體的選擇。目的基因指科學(xué)家感興趣的外源基因，其來(lái)源有幾種途徑：化學(xué)合成、PCR技術(shù)、基因組文庫(kù)或cDNA文庫(kù)中獲得。載體是目的基因的攜帶者，常用的載體有質(zhì)粒、噬菌體等。2．切，即限制性核酸內(nèi)切酶的應(yīng)用。限制性?xún)?nèi)切酶是識(shí)別DNA的特異序列，并在識(shí)別位點(diǎn)或其周?chē)懈铍p鏈DNA的一類(lèi)內(nèi)切酶，是實(shí)現(xiàn)重組DNA技術(shù)的重要的工具酶。3．接，即將目的基因與載體連接形成重組體（或重組DNA）。4．轉(zhuǎn)

3、，即將重組體導(dǎo)入宿主菌（或細(xì)胞），根據(jù)采用的載體性質(zhì)不同，將重組體導(dǎo)入宿主菌的方法有轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)染及感染。5．篩，即重組體的篩選與鑒定，將重組體導(dǎo)入宿主菌后，通過(guò)適當(dāng)形式的培養(yǎng)板生長(zhǎng)即可獲得一定的抗藥菌落。利用原位雜交，和Southern印跡或免疫學(xué)方法對(duì)抗藥菌落進(jìn)行篩選，獲得含目的基因的轉(zhuǎn)化子菌落，再經(jīng)擴(kuò)增、分離重組DNA獲得基因克隆。重組DNA技術(shù)在疾病基因的發(fā)現(xiàn)，表達(dá)有藥用價(jià)值的蛋白質(zhì)，DNA診斷及疾病的預(yù)防等方面具有廣泛應(yīng)用價(jià)值，并促進(jìn)了當(dāng)代分子醫(yī)學(xué)的誕生和發(fā)展。一、選擇題【A型題】1．下列DNA序列屬于回文結(jié)構(gòu)的是（）A．ATGCC

4、GTACGGCB．GAATTCCTTAAGC．GGCCGGCCGGCCD．TCTGACAGACTGE．CTAGGGGATCCC2．DNA經(jīng)限制性?xún)?nèi)切核酸酶切割后，斷端易于首尾相接，自行成環(huán)。這是因?yàn)榇嬖谥ǎ?A．鈍性末端B．平端C．粘性末端D．5’端E．3’端3．限制性?xún)?nèi)切核酸酶的通常識(shí)別序列是（）A．粘性末端B．聚腺苷酸C．回文對(duì)稱(chēng)序列D．RNA聚合酶附著點(diǎn)E．甲基化“帽”結(jié)構(gòu)4．pBR322是（）A．經(jīng)人工改造的大腸桿菌質(zhì)粒B．天然的大腸桿菌質(zhì)粒C．天然的酵母質(zhì)粒D．經(jīng)人工改造的大腸桿菌噬菌體E．經(jīng)人工改造的酵母質(zhì)粒5．免疫球蛋白的

5、生成是通過(guò)以下哪個(gè)過(guò)程（）A．轉(zhuǎn)化B．轉(zhuǎn)導(dǎo)C．轉(zhuǎn)染D．轉(zhuǎn)位E．溶原6．常用載體-質(zhì)粒的特點(diǎn)（）A．是線(xiàn)形雙鏈DNAB．插入片斷的容納量比λ噬菌體DNA大C．含有抗藥性基因D．含有同一限制性?xún)?nèi)切核酸酶的多個(gè)切口E．不隨細(xì)菌繁殖而進(jìn)行自我復(fù)制7．基因工程的操作程序可概括為（）A．切、轉(zhuǎn)、接、篩、分B．轉(zhuǎn)、接、篩、分、切C．接、篩、分、切、轉(zhuǎn)D．篩、分、切、轉(zhuǎn)、接E．分、切、接、轉(zhuǎn)、篩8．cDNA文庫(kù)指（）A．一個(gè)生物組織和細(xì)胞的全部基因信息B．一個(gè)生物組織和細(xì)胞的全部mRNA信息C．一個(gè)生物組織和細(xì)胞所表達(dá)的mRNA信息D．一個(gè)物種的全部mR

6、NA信息E．一個(gè)物種的全部基因信息9．限制性?xún)?nèi)切核酸酶（）A．可將單鏈DNA任意切斷B．由噬菌體提取而得C．可將雙鏈DNA序列特異地切開(kāi)D．可將兩個(gè)DNA分子連接起來(lái)E．不受DNA甲基化影響10．在重組DNA技術(shù)中，不常用的酶是（）A．限制性?xún)?nèi)切核酸酶B．DNA聚合酶C．DNA連接酶D．反轉(zhuǎn)錄酶E．DNA解鏈酶11．可作為重組DNA的目的基因的是（）A．mRNAB．tRNAC．rRNAD．基因組DNAE．mRNA和基因組DNA12．以質(zhì)粒為載體，將外源基因?qū)胧荏w菌的過(guò)程稱(chēng)（）A．轉(zhuǎn)化B．轉(zhuǎn)染C．感染D．轉(zhuǎn)導(dǎo)E．轉(zhuǎn)移13．最常用的篩選轉(zhuǎn)化

7、細(xì)菌是否含質(zhì)粒的方法是（）A．營(yíng)養(yǎng)互補(bǔ)篩選B．抗藥性篩選C．免疫學(xué)方法D．PCR篩選E．分子雜交篩選14．α-互補(bǔ)篩選法屬于（）A．抗藥性標(biāo)志篩選B．酶免檢測(cè)分析C．標(biāo)志補(bǔ)救篩選D．原位雜交篩選E．免疫學(xué)方法15．F因子從一個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至另一個(gè)細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)移過(guò)程稱(chēng)為（）A．轉(zhuǎn)化B．轉(zhuǎn)導(dǎo)C．轉(zhuǎn)染D．轉(zhuǎn)座E．接合16．由插入序列和轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)的基因移位或重排稱(chēng)為（）A．轉(zhuǎn)化B．轉(zhuǎn)導(dǎo)C．轉(zhuǎn)染D．轉(zhuǎn)座E．接合17．發(fā)生在同源序列間的重組稱(chēng)為（）A．位點(diǎn)特異的重組B．非位點(diǎn)特異的重組8C．基本重組D．隨機(jī)重組E．人工重組18．在重組DNA技術(shù)中催化形成

8、重組DNA分子的是DNA（）A．聚合酶B．解鏈酶C．連接酶D．拓?fù)涿窫．內(nèi)切酶19．在重組DNA技術(shù)領(lǐng)域所說(shuō)的分子克隆是指（）A．建立單克隆抗體B．建立多克隆抗體C．構(gòu)建重組DNA分子D．無(wú)性