抗血管內(nèi)皮生長因子小干擾rna抑制大鼠角膜新生血管.pdf

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1、上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文抗血管內(nèi)皮生長因子小干擾RNA抑制大鼠角膜新生血管姓名：李瑾申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：眼科學(xué)指導(dǎo)教師：范先群20060501 角膜新生血管化?????????????，??常導(dǎo)致角膜失去透明性，是致盲的重要原因????????的變化特征，探討基因干預(yù)的最佳時段；采用??聯(lián)合培養(yǎng)角膜材料和方法 結(jié)果上皮細胞均可表達????在角膜上皮細胞和以羊膜為載體的角膜上皮細胞中的表達量無顯著性差異；?甐??猻??轉(zhuǎn)染的角膜上皮細胞和基質(zhì)細胞，其??基因和蛋白表??，?? 水平各時段均顯著低于對照組。 ??????????????????????????????，?

2、???????? ?????????????????????—???猼?????????????????????????????? ???????????瓵???????????????????????? ?????????????瑃?????????—?????????????????????????????????????????? ??????，?????????????，???? 符號說明表 第一章皮細胞線粒體也受到一定的損傷。 大量研究表明??主要作用是。?埃??增加微血管通透性，促進血漿纖維蛋??????等“?在動物角膜中注射表達?? 管形成，而給予??抗體則

3、可抑制眼內(nèi)新生血管。以上各項研究表明??是最主要的血管形成因子之一。??—??用于抑制脈絡(luò)膜新生血管的研究，取得了良好的實驗效果，為??技術(shù)應(yīng)??狟?型受體的???轉(zhuǎn)染鼠角膜組織，體內(nèi)實驗結(jié)果顯示????特異性實驗證明了角膜組織具有??效應(yīng)。???等“?研究了???在眼部的表達時限， 生排斥反應(yīng)的高危因素。過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。目前認為，斑管內(nèi)皮生長因子???是最主要的血管形成? 北京東方特力科貿(mào)中心哈爾濱東聯(lián)公司美國?公司???倒置相差顯微鏡???薷潑玖姿峒罨撼逡???通用型??免疫組化試劑盒??公司，丹麥武漢博士德生物工程有限公司?甊?狿?試劑 ?×反應(yīng)緩沖液北京華美生

4、物工程公司美國庫爾特公司北京華美生物工程公司上海生物工程公司美國?????公司????籗?笫螅??眼，用??疞鹽酸氯胺酮注射液???／?肌肉注射麻醉。無鏈霉素?鱨??痬?的??航??次，待用。 ? ??．??免疫組化鑒定??ū甌窘?攵?妝郊郵??旌弦褐衛(wèi)??，然后換入已熔的純石蠟???????渭??フ?Ｃ嘌蜓G澹???，?分鐘；???パG澹?渭覣?抗體?：?????，?分鐘； 上皮細胞????的表達?????煸齲?檬椅?分鐘???煸??脛櫻?帽??分鐘；????ヒ掖糽?，???胄?分鐘，?疌?馗匆淮?；???掖幾稍锍戀?“?分鐘；???煸齲???疌保存?zhèn)溆茫? 微波爐煮沸

5、??左右時，加?％甲醛??，灌取???????逡葉????在????????苤屑尤胱躌?抽提液和??—???棺芴寤???中各樣品總??昧課?．?力口入?????????????????瓹處理?種櫻??俠淙矗?椅賂咚倮胄?秒鐘，將所有溶液收集到管底。 ??攵韻喙鼗?蛐蛄猩杓鋪匾煲??表????諼蘧?”赑?管中按次序加入下列試劑?? ?疌保存??痬???纈臼奔???，?染色。紫外透射成像系統(tǒng)觀察，電腦攝像儲存，凝??表達相對值????庵擔疓??吸光值。胞形態(tài)與原代相似。 ???????? ????????? ??? 以羊膜為載體培養(yǎng)角膜上皮層，由羊膜基底膜和復(fù)層的角膜上皮細胞

6、組成，共?????????????????????? ???????????????????????角膜上皮細胞、基質(zhì)細胞、羊膜為載體培養(yǎng)角膜上皮細胞?? 條帶很清晰。????的顯色強度為?簂，說明??暾?院茫?幢喚到?圖?。???????????籯?????，???????籧????盅?匪?樘岬腞?紫外吸收值及濃度 ??角膜上皮細胞、基質(zhì)細胞、羊膜為載體角膜上皮細胞????均可表達??。??上皮細胞?換?氏赴?一羊膜為載體角膜上皮細胞??????????? ????????????? ? ??還能增加細胞鈣離子濃度。??與受體結(jié)合后可迅速短暫地增加內(nèi)皮細胞角膜新生血管形

7、成的機理目前尚不完全清楚，但細胞因子在其中的作用一直是人們關(guān)注的重點。生理狀態(tài)下，角膜的拮抗血管形成因子和血管形成因子共同表達并維持在平衡水平，可有效避免新生血管形成。但在外傷、炎癥等病理狀態(tài)下，角膜血管形成因子異常增高表達，拮抗血管形成因子的表達水平不足以抑制其作用，從而引起新生血管的大量形成。 ?????觥觥瘛觥觥瘛鰎，表明??可能不參與血管內(nèi)皮細胞的增生和移行。?—?魑Q字⒔櫓試贑?早期發(fā)達????的質(zhì)粒能引起角膜和前房新生血管形成，而給予??抗體則可部分抑制情況，結(jié)果顯示，正常角膜上皮和基質(zhì)細胞均能表達????，進一步