本試劑僅供研究使用

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1、本試劑僅供研究使用大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)elisa試劑盒使用說明書試劑盒組成：48孔配置/96孔配置說明書：1份封板膜：2片（48）/2片（96）密封袋：1個(gè)目的：【大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)elisa試劑盒說明書】本試劑盒用于測(cè)定大鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)的含量。服務(wù)承諾：?供貨期：款到發(fā)貨。工作時(shí)間內(nèi)免費(fèi)的技術(shù)咨詢和指導(dǎo)?。請(qǐng)來(lái)電咨詢?yōu)榭蛻籼峁﹣?lái)樣檢測(cè)服務(wù)，最大限度實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性(免費(fèi)代測(cè))。試劑盒性能：1.樣品線性回

2、歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11%保存條件及有效期：1.試劑盒保存：2-8℃。2．有效期：6個(gè)月檢測(cè)范圍：0.2IU/L-6IU/L試劑盒組成：酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品：2700ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標(biāo)試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8

3、℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存實(shí)驗(yàn)原理：【大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)elisa試劑盒說明書】本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)水平。用純化的大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)，再與HRP標(biāo)記的血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)抗體結(jié)合，形

4、成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物3，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)濃度。樣本處理及要求：1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸

5、檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。3.尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)

6、胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。5.組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.7

7、.不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在第一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔

8、中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為1800ng/L，1200ng/L，600ng/L，300ng/L，150ng/L）。2.加樣：分別設(shè)空