培養(yǎng)基的制備和滅菌

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1、環(huán)工綜合實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基的制備和滅菌實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)報(bào)告環(huán)境科學(xué)與工程學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心實(shí)驗(yàn)題目培養(yǎng)基的制備和滅菌實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)類別綜合實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)時(shí)間實(shí)驗(yàn)環(huán)境溫度:濕度:同組人數(shù)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、了解培養(yǎng)基的配制原理； 2、掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟； 3、了解常見滅菌、清毒基本原理及方法； 4、掌握高壓蒸汽滅菌的操作方法。二、實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備儀器：高壓滅菌鍋，1個(gè)1000mL燒杯，10套固體培養(yǎng)基，2個(gè)250mL錐形瓶，1根5mL、4根1mL移液管，8支小試管等玻璃器皿，報(bào)紙，繩子，棉花，三角架，石棉網(wǎng)，煤氣燈試劑：牛肉湯瓊脂培養(yǎng)基固體粉末，自來水三、實(shí)

2、驗(yàn)原理培養(yǎng)基是人工按一定比例配制的供微生物生長(zhǎng)繁殖和合成代謝產(chǎn)物所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的混合物。培養(yǎng)基的原材料一般為碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長(zhǎng)因素和水。根據(jù)微生物的種類和實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌囵B(yǎng)基有不同的種類和配制方法。 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基，有時(shí)又稱為普通培養(yǎng)基。由于這種培養(yǎng)基中含有一般細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖所需要的最基本的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，所以可供微生物生長(zhǎng)繁殖之用。 對(duì)細(xì)菌分離純化，需要做到相關(guān)玻璃器皿和培養(yǎng)基無菌，以避免雜菌干擾。干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌方法主要是通過升溫使蛋白質(zhì)變性從而達(dá)到殺死微生物的效果。實(shí)驗(yàn)原理問

3、答題：1、培養(yǎng)基的類型有哪些？瓊脂和硅膠均可作為固化劑使用，應(yīng)用上有何區(qū)別？答：⑴根據(jù)培養(yǎng)液物理狀態(tài)分為固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基；根據(jù)用途分為增殖培養(yǎng)基和鑒定培養(yǎng)基；根據(jù)微生物種類分為細(xì)菌培養(yǎng)基、放線菌培養(yǎng)基、酵母菌培養(yǎng)基、霉菌培養(yǎng)基；根據(jù)培養(yǎng)基成分分為天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基。⑵硅膠用于配制自養(yǎng)微生物的固體培養(yǎng)基。對(duì)其他多數(shù)微生物來講,以瓊脂最為合適。2、滅菌和消毒的區(qū)別是什么？滅菌的方法有哪些？什么是巴氏消毒，有何應(yīng)用？ 答：⑴區(qū)別：第一，兩者要求達(dá)到的處理水平不同。消毒只要求殺滅或/和清除致病微生物，

4、使其數(shù)量減少到不再能引起人發(fā)病。滅菌則要求將所有微生物（包括細(xì)菌、病毒、真菌、支原體、衣原體等）全部殺滅或/和清除掉，包括非致病微生物以及抵抗力極強(qiáng)的細(xì)菌芽孢在內(nèi)。因此，消毒只要求場(chǎng)所與物品達(dá)到無害化水平，而滅菌則要求達(dá)到?jīng)]有一個(gè)活菌存在。第二，兩者選用的處理方法不同。滅菌與消毒相比，要求更高，處理更難。滅菌必須選用能殺滅抵抗力最強(qiáng)的微生物（細(xì)菌芽孢）的物理方法或化學(xué)滅菌劑，而消毒只需選用具有一定殺菌效力的物理方法、化學(xué)消毒劑或生物消毒劑。第三，應(yīng)用的場(chǎng)所與處理的物品也不同。滅菌主要用于處理醫(yī)院中進(jìn)入人體無菌組織器官的診療用品和需

5、要滅菌的工業(yè)產(chǎn)品，消毒用于處理日常生活和工作場(chǎng)所的物品，也用于醫(yī)院中一般場(chǎng)所與物品的處理。⑵滅菌方法：干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌、紫外線滅菌、微孔濾膜過濾除菌等。⑶巴氏消毒：不同的細(xì)菌有不同的最適生長(zhǎng)溫度和耐熱、耐冷能力。巴氏消毒就是利用病原體不是很耐熱的特點(diǎn)，用適當(dāng)?shù)臏囟群捅貢r(shí)間處理，將其全部殺滅。但經(jīng)巴氏消毒后，仍保存小部分無害或有益、較耐熱的細(xì)菌或細(xì)菌芽孢。常用方法有兩種：加熱對(duì)象到62-65℃，保持30分鐘或者加熱到75-90℃，保溫15-16秒，其殺菌時(shí)間更短，工作效率更高。目前常應(yīng)用于消毒牛奶、啤酒、白酒、血清蛋白等。3

6、、高壓蒸汽滅菌的原理是什么? 答：密閉的加壓滅菌鍋內(nèi)，通過加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰產(chǎn)生蒸汽,由于蒸汽不能溢出而增加了滅菌鍋內(nèi)的壓力，從而使沸點(diǎn)增高，得到高于100℃的溫度。導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)在高溫下凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。可殺滅包括芽胞在內(nèi)的所有微生物。四、實(shí)驗(yàn)步驟1、將400ml水燒開，迅速放入12.4g牛肉湯瓊脂培養(yǎng)基，攪拌至溶解。 2、取200mL溶解沸騰后的培養(yǎng)基液趁熱裝入1個(gè)錐形瓶中，取一只250ml錐形瓶，內(nèi)裝200ml自來水，錐形瓶瓶口加棉塞后用報(bào)紙包扎。 3、對(duì)5根1ml移液管、一根5ml移液管、8個(gè)小試管加棉塞

7、后用報(bào)紙包扎，10套培養(yǎng)皿用報(bào)紙包扎 4、所有包扎物放入高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)進(jìn)行滅菌。維持高壓鍋內(nèi)壓強(qiáng)在0.7～0.8MPa之間約15分鐘，拔掉電源結(jié)束加壓。5、收拾試驗(yàn)臺(tái)，歸整儀器用具。 五、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)1、所有玻璃器皿應(yīng)該洗凈后適當(dāng)甩干，再包扎。 2、小試管管口、錐形瓶瓶口和移液管后端均用棉花堵塞，不過緊或過松，防止微生物侵入。 3、高壓滅菌要注意物品不要過多，加熱后排除冷空氣，到時(shí)降壓回零取物。六、思考題1.現(xiàn)有血清培養(yǎng)基需要滅菌，請(qǐng)思考確定除菌方法和過程。答：0.22um微孔濾膜過濾除菌，在溫水中恒溫15min，現(xiàn)用現(xiàn)除。一般

8、血清培養(yǎng)基中還可加入抗生素。2、75%的酒精和95%酒精哪種消毒效果更好？為什么？答：75%的好。酒精能夠吸收細(xì)菌蛋白的水分，使其脫水變性凝固，從而達(dá)到殺滅細(xì)菌的目的。如果使用高濃度酒精，對(duì)細(xì)菌蛋白脫水過于迅速，使細(xì)菌表面蛋白質(zhì)首先變性凝固，形成了