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1、萌發(fā)小麥種子中淀粉酶的提取、酶活性的測定及PH、溫度、激活劑、抑制劑對酶活性的影響(東北農業(yè)大學生命科學學院,哈爾濱:150030)?摘要：從萌發(fā)的小麥種子中通過離心方法提取淀粉酶，采用分光光度計法繪制麥芽糖標準曲線，并在此基礎上測定萌發(fā)小麥種子中淀粉酶的活性。溫度、PH值、激活劑、抑制劑是影響酶活性的幾個重要因素。本實驗結果表明，在PH=5.6，T=40℃的條件下，小麥種子中淀粉酶總活性為2325.71mg/g·5min，而α-淀粉酶的活性為246.33mg/g·5min；40℃左右時，酶的活性最高，室溫下活性較高，0℃時淀粉酶活性明顯下降，100℃時淀粉酶幾乎已失活；
2、PH為5.6時，酶的活性最大，PH=3.6時和PH=8.0時淀粉酶活性降至最低；Cl-使酶的活性增強，Cu2+使酶活性減弱。?關鍵詞：淀粉酶酶活性溫度PH激活劑抑制劑?前言：生物體內的新陳代謝是一切生命活動的基礎。新陳代謝是由許多復雜而有規(guī)律的化學反應組成，酶是生物體系中的催化劑，生物體內的各種化學反應包括物質轉化和能量轉化，都是在特定的酶催化下反應的，由于自然界中生物長期進化和組織功能分化的結果，酶在機體中受到嚴格的調控，使錯綜復雜的代謝過程有序進行?？梢哉f，沒有酶的參與，生命活動即告終止，所以酶學的深入研究在探討生命現象的本質上使至關重要的[1]。大多數酶的本質是蛋白
3、質。酶的特性決定了其研究內容的特殊性。隨著生物化學、分子生物學、基因工程、化學工程等相關學科的發(fā)展，酶學研究早已進入一個嶄新的階段。現代酶學的研究主要包括酶學理論、酶工程和酶應用3部分[2]。它們是現代生物技術的重要組成部分，應用范圍包括醫(yī)藥，食品，化學工業(yè)，診斷分析和生物傳感器，涉及的品種不少，如淀粉酶，其市場需求生產規(guī)模和產值均很樂觀，并已產生巨大經濟效益[3]。生物體內的各種代謝變化都是由酶驅動的,酶有兩種功能:其一，催化各種生化反應,是生物催化劑；其二，調節(jié)和控制代謝的速度、方向和途徑，是新陳代謝的調節(jié)元件。酶對細胞代謝的調節(jié)主要有兩種方式:一是通過激活或抑制以改
4、變細胞內已有酶分子的催化活性；另一種是通過影響酶分子的合成和降解，以改變酶分子的含量。這種酶水平的調節(jié)機制是代謝的最關鍵的調節(jié)[4]。按照淀粉酶水解淀粉的作用方式，可以分為α-淀粉酶、β-淀粉酶、異淀粉酶和麥芽糖酶四種類型。實驗證明，當谷類種子萌發(fā)時，兩類淀粉酶（α，β型）都存在，淀粉酶總酶活性隨種子萌發(fā)將升高，有利于淀粉被降解為植物生長發(fā)育所需的葡萄糖。許多微生物包括細菌、真菌和酵母都能生產淀粉酶，這些廉價的淀粉酶來源，已廣泛應用于食品、醫(yī)藥、飼料和環(huán)保等生產實踐中[5]。在醫(yī)學上測定淀粉酶活性的方法有：簡易快速紙片測定法[6]；蘇木杰氏快速計時法[7]；單一穩(wěn)定液體試
5、劑直接測定法[8]等。池永煥，黃菱紅等探究了溫度對淀粉酶活性的影響[9]；沈文英,胡洪國,潘雅娟研究了溫度和PH值對南美白對蝦(Penaeusvannmei)消化酶活性的影響[10]；司紅起,馬傳喜,董召榮,吳大鵬,高俊進行了小麥多酚氧化酶抑制和激活效應的研究[11]。本實驗僅限于酶學研究的最基本的理論和實驗技能。通過此次實驗研究，能夠進一步加深對淀粉酶的認識和學習，學會科學合理的設計實驗方案,為以后的研究打下堅實的基礎。??1.材料與方法1.1材料、儀器、試劑1.1.1材料萌發(fā)的小麥種子(芽長約5cm)。將小麥種子用28℃～30℃的溫水浸泡3～5小時，充分吸水膨脹。把濕
6、潤的細沙倒入盆中撒入浸泡的小麥種子，播種深度約3厘米，以后保持細沙濕度；7天后刨出麥種，即得芽長約5cm的小麥種子。1.1.2儀器分光光度計；離心機；配兩支25mL離心管；小臺秤；研缽；容量瓶100mL；具塞刻度試管；試管；移液管；恒溫水箱。1.1.3主要試劑及配制方法???①1％淀粉：稱取1.0g淀粉定容到100mL容量瓶中。???②0.1mol/LpH5.6的檸檬酸緩沖液：A液：稱取檸檬酸20.01g，溶解后稀釋至l000mL；B液：稱取檸檬酸鈉29.41g，溶解后稀釋至1000mL。取A液55mL與B液145mL混勻，即為pH5.6的緩沖液。?③DNS-試劑：精確稱
7、取3,5–二硝基水楊酸1g溶于20mL2mol/LNaOH中，加入50mL蒸餾水，再加入30g酒石酸鉀鈉，待溶解后，用蒸餾水稀釋至100mL，蓋緊瓶塞，勿使二氧化碳進入。④麥芽糖標準液：稱取麥芽糖0.100g溶于少量蒸餾水中，仔細移入100mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度。⑤0.4mol/L的NaOH。1.2方法1.2.1麥芽糖標準曲線制作取干凈的25ml刻度試管7個，編號，分別加入麥芽糖標準液（1mg/ml）0.0、0.2、0.6、1.0、1.4、2.0、2.5ml。然后于各瓶加蒸餾水使溶液達2.5ml。再各加入3，5-二硝
