高效液相色譜儀(hplc)校正方法

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1、高效液相色譜儀（HPLC）校正方法0.1??????輸液系統(tǒng)：0.1.1???梯度誤差GC不超過±3%0.1.2???泵流量設(shè)定值誤差Ss＜±2%0.1.3???流量穩(wěn)定性誤差SR＜±2%0.2??????紫外檢測(cè)器性能0.2.1???基線噪聲不超過5×10-4AU，基線漂移不超過5×10-3AU0.2.2???定量測(cè)量重復(fù)性誤差（6次進(jìn)樣）RSD≤1.5%0.2.3???最小檢測(cè)濃度不超過1×10-7g/ml萘/甲醇溶液0.2.4???可調(diào)波長(zhǎng)紫外可見光檢測(cè)器波長(zhǎng)示值不超過±2nm(HP1100高效液相色譜儀可由儀器自

2、身完成)1?????????校正條件1.1??????環(huán)境溫度10-30℃，相對(duì)濕度低于65%1.2??????校正設(shè)備1.2.1???秒表分度值小于0.1s1.2.2???分析天平最大稱量200g,最小分度值0.1mg1.2.3???容量瓶1.2.4???微量注射器1.3??????標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和試劑1.3.1???HPLC用甲醇、純水，分析純的丙酮1.3.2???1×10-4g/ml，1×10-7g/ml的萘甲醇溶液1.3.3???紫外波長(zhǎng)標(biāo)準(zhǔn)溶液2?????????校正方法2.1??????梯度誤差GC的校正2.1.1

3、???進(jìn)行梯度洗脫程序，A溶劑為水，B溶劑為0.1%丙酮的水溶液，B經(jīng)5個(gè)階段從0變到100%，20%—40%—60%—80%—100%，重復(fù)測(cè)量?jī)纱?，取平均值，求各段梯度誤差Gci，取最大作為儀器梯度誤差，公式：Gci=（Li—Lm）/Lm×100%Li：第i段信號(hào)值的平均值；Lm：各段輸出信號(hào)平均值的平均值可接受標(biāo)準(zhǔn)：-3%≤Gci≤3%2.2??????泵流量設(shè)定值誤差Ss、流量穩(wěn)定性誤差SR的校正2.2.1???將儀器的輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣器、色譜柱和檢測(cè)器聯(lián)接好，以甲醇為流動(dòng)相，按表一設(shè)定流量，待流速穩(wěn)定后，在流動(dòng)

4、相排出口用事先清洗稱重過的容量瓶收集流動(dòng)相，同時(shí)用秒表計(jì)時(shí)，準(zhǔn)確的收集10-25分鐘，稱重，按下式計(jì)算流動(dòng)相流量設(shè)定值誤差Ss和流動(dòng)相流量穩(wěn)定性誤差SR。公式：Ss=（Fm-FS）/Fs100%可接受標(biāo)準(zhǔn)：-2%≤Ss≤2%SR=（Fmax-Fmin）/F×100%可接受標(biāo)準(zhǔn)：-2%≤SR≤2%Ss：流量設(shè)定值誤差（%）；Fm=（W2-W1）/ρt.t：流量實(shí)測(cè)值（ml/min）W2：容量瓶+流動(dòng)相的重量（g）；W1：容量瓶的重量（g）；Fs：流量設(shè)定值（ml/min）；ρt：實(shí)驗(yàn)室溫度下流動(dòng)相的密度（g/cm3）；t：

5、收集流動(dòng)相的時(shí)間（min）；SR：流量穩(wěn)定性誤差（%）；Fmax為同一組測(cè)量中流量最大值（ml/min）；Fmin：同一組測(cè)量中流量最小值（ml/min）；F為同一組測(cè)量值的算術(shù)平均值（ml/min）表一：Ss和SR的校正流量設(shè)定值（ml/min）1.01.5測(cè)量次數(shù)33收集流動(dòng)相時(shí)間（min）1510允許誤差Ss2％2％SR2％2％2.3??????基線噪聲和漂移2.3.1???選用C18的色譜柱，以波長(zhǎng)254nm,流動(dòng)相為100%甲醇，流速1.0ml/min，儀器穩(wěn)定后記錄基線30min，求基線噪聲Nd?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)：

6、Nd≤5×10-4AU2.3.2???基線漂移用1h內(nèi)基線偏離原點(diǎn)的值（AU/h）表示?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)：D≤5×10-3AU/h2.4??????最小檢測(cè)濃度2.4.1????????????以上述色譜條件下，進(jìn)樣20ul的1×10-7g/ml的萘甲醇溶液，計(jì)算最小檢測(cè)濃度CL。公式：CL=2NdC×20HVNd：基線噪聲，mm；C：標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，g/ml；H：標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜峰的峰高，mm；V——進(jìn)樣體積，ul。2.4.2????????????可接受標(biāo)準(zhǔn)：CL≤1×10-7g/ml2.5??????定量測(cè)定重復(fù)性的校正將儀器

7、聯(lián)接好，使之處于正常工作狀態(tài)，波長(zhǎng)254nm,流動(dòng)相為100%甲醇，流速1.0ml/min,用萘的甲醇溶液連續(xù)進(jìn)樣6次記錄下峰面積，按下式計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差：nRSD=[∑（Xi-X）2]/（n-1）×(1/X)×100%I=1RSD：相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（%）；n：測(cè)量次數(shù)；Xi：第I次測(cè)量的峰面積X–n次進(jìn)樣的峰面積算術(shù)平均值可接受標(biāo)準(zhǔn)：RSD≤1.5%2.6??????波長(zhǎng)示值誤差2.6.1????????????用注射器將紫外波長(zhǎng)標(biāo)準(zhǔn)溶液（標(biāo)準(zhǔn)波長(zhǎng)為235nm，257nm，313nm和350nm）從檢測(cè)器入口注入樣品池沖洗

8、，并將池充滿，將波長(zhǎng)調(diào)到低于標(biāo)準(zhǔn)波長(zhǎng)5nm處，到標(biāo)準(zhǔn)波長(zhǎng)+4nm處，測(cè)得的最大吸收值處對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)與標(biāo)準(zhǔn)波長(zhǎng)之差為波長(zhǎng)示值誤差；目前儀器可以在1ml/min的流量下，直接用空管連接檢測(cè)器，每隔2min改變1nm，連續(xù)進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)樣10ul，同樣可得波長(zhǎng)示值誤差。2.6.2???可調(diào)波長(zhǎng)紫外可見光檢測(cè)器波長(zhǎng)示值誤差(此項(xiàng)只適用