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《cycline蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達及意義》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、CyclinE蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達及意義作者：張金添，黃漢興，吳永廉【摘要】目的觀察CyclinE在食管鱗狀細(xì)胞癌和癌周正常食管組織的表達，從量化角度闡明其在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中表達的病理學(xué)意義。方法常規(guī)石蠟包埋、HE切片確診，免疫組化MaxVision法檢測CyclinE在食管鱗狀細(xì)胞癌和癌周正常食管組織的定位和表達，Image-proplus圖像分析軟件對其表達強度進行定量分析，并用表達的陽性單位(positiveunit，PU)反映其表達強度。結(jié)果CyclinE蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌和癌周正常食管組織中的表
2、達主要定位在細(xì)胞核。食管鱗狀細(xì)胞癌表達的PU值高于癌周正常食管組織(P<0.01)，CyclinE蛋白表達的PU值與食管癌分化程度有關(guān)(P<0.01)，低分化鱗狀細(xì)胞癌表達的PU值高于高分化及中分化鱗狀細(xì)胞癌。CyclinE蛋白表達的PU值與食管癌患者的性別、年齡、轉(zhuǎn)移和TNM分期未見明顯相關(guān)性(P>0.05)。結(jié)論CyclinE蛋白表達程度與食管鱗狀細(xì)胞癌及分化程度具有相關(guān)性，可能成為判斷其指標(biāo)之一。【關(guān)鍵詞】食管癌;CyclinE;免疫組化;定量分析9細(xì)胞周期蛋白E(CyclinE)在多種腫瘤中有基因
3、過表達，對腫瘤的發(fā)生發(fā)展起重要作用，已被證實是一種癌基因[1-2]。本研究擬通過原位定量檢測CyclinE蛋白的表達，從量化角度揭示其在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達特點，闡明其與食管鱗狀細(xì)胞癌分化程度、轉(zhuǎn)移和分期的關(guān)系，探索其在食管鱗狀細(xì)胞癌中表達的意義。 1材料和方法 1.1材料及分組收集福建省莆田市第一醫(yī)院病理科資料完整的原發(fā)性食管鱗狀細(xì)胞癌手術(shù)切除標(biāo)本(術(shù)前未經(jīng)治療)54例，其中男37例，女17例，年齡最小43歲，最大80歲，平均61歲;高分化19例，中分化22例，低分化13例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者26例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者28例
4、;TNM分期Ⅰ期6例，Ⅱ期29例，Ⅲ期19例。同時取20例癌周正常食管組織(距腫物5cm以上)做為正常對照。所有標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林固定、常規(guī)石蠟包埋、切片(厚度4μm)、HE染色?！ ?.2免疫組織化學(xué)染色免疫組化采用MaxVision法。一抗為鼠抗人CyclinE單克隆抗體(即用型)、MaxVision試劑盒及DAB顯色試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。主要步驟如下：石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，1mmol·9L-1、pH6.0檸檬酸高壓修復(fù)抗原1.5min，3%H2O2室溫孵育10min，以清除內(nèi)源性過氧化物酶活性，滴加一
5、抗室溫孵育60min;滴加二抗室溫孵育15min，DAB顯色5min;不復(fù)染(用于圖像定量分析)，脫水、透明、封固。每批免疫組化染色均設(shè)立陽性和陰性對照，用已知陽性切片作為陽性對照，用PBS緩沖液替代一抗作為陰性對照?！ ?.3顯微圖像定量分析根據(jù)陰性和陽性對照的顯色情況，在確定無假陽性和假陰性的前提下，以細(xì)胞核染成淺黃色、棕黃色或棕褐色為陽性。用Image-proplus圖像分析系統(tǒng)，在40倍物鏡下，每例樣本隨機選取10個視野，共測試200個陽性細(xì)胞，用交互式測試方法測試每個陽性細(xì)胞的灰度值為Gβ，同時在相應(yīng)的切片中測試
6、背景灰度值Gα，按下式計算每個陽性細(xì)胞的陽性單位值,本圖像分析系統(tǒng)中的Gmax為256，取每個樣本中200個陽性細(xì)胞值的均值作為此樣本表達的陽性單位值(PositiveUnit,PU)。PU值越大，表達強度越高;反之，表達強度越低?！ U=
7、Gα-Gβ
8、Gmax×100 1.4統(tǒng)計學(xué)方法用SPSS11.0統(tǒng)計分析軟件進行數(shù)據(jù)處理,采用兩樣本t檢驗和方差分析，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義?！ ?結(jié)果 CyclinE染色主要在細(xì)胞核內(nèi)，染色呈淺黃色、棕黃色、棕褐色為陽性細(xì)胞(圖1，見封3)。9 2.1Cyc
9、linE在食管鱗狀細(xì)胞癌和正常食管黏膜上皮細(xì)胞核中的表達食管鱗狀細(xì)胞癌和正常食管細(xì)胞的CyclinE蛋白表達程度不同(8.37±3.86PU,3.29±2.03PU)，二者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=7.317，P<0.01)?！ ?.2CyclinE在不同分化程度食管鱗狀細(xì)胞癌癌細(xì)胞核中的表達 CyclinE蛋白在不同分化程度的食管鱗狀細(xì)胞癌呈陽性表達，但其表達程度不同，CyclinE蛋白表達的PU值在高分化、中分化和低分化食管鱗狀細(xì)胞癌間總體比較的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，其中高分化食管鱗狀細(xì)胞癌組及中
10、分化食管鱗狀細(xì)胞癌組CyclinE蛋白表達的PU值顯著低于低分化食管鱗狀細(xì)胞癌組(P<0.05)，見表1。表1CyclinE在不同分化程度食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞中的表達組別nPU值(±s) 2.3CyclinE蛋白表達與食管癌患者性別、年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期的關(guān)系 CyclinE蛋白表達的P
