mfshr基因n端片段的序列分析、原核表達(dá)載體構(gòu)建及其表達(dá)

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1、mFSHR基因N端片段的序列分析、原核表達(dá)載體構(gòu)建及其表達(dá)作者：黃海雁，文夢(mèng)靈，張惠玲【摘要】目的：克隆小鼠卵泡刺激素受體(FSHR)基因N端部分片段(2890aa)(mFSHRn);預(yù)測(cè)其編碼蛋白作為候選避孕疫苗的可行性;構(gòu)建原核表達(dá)重組質(zhì)粒，并在大腸桿菌中表達(dá)。方法：提取小鼠睪丸組織總RNA，利用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RTPCR)技術(shù)反轉(zhuǎn)錄成cDNA，按照GeneBank中小鼠FSHRN端序列設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增基因片段并插入pET32a載體，測(cè)序鑒定后做生物信息學(xué)分析;質(zhì)粒轉(zhuǎn)化E.coliBL21(DE3)感受態(tài)菌株誘導(dǎo)表達(dá)蛋白。結(jié)果：擴(kuò)增

2、片段長(zhǎng)度為186bp,測(cè)序結(jié)果與預(yù)期結(jié)果完全一致，生物信息學(xué)分析其編碼蛋白具有良好的抗原性;重組原核表達(dá)質(zhì)粒經(jīng)鑒定獲得正確重組子并誘導(dǎo)表達(dá)。結(jié)論:mFSHRn蛋白可作為良好的候選避孕疫苗，成功構(gòu)建了pET32amFHSRn原核表達(dá)重組質(zhì)粒，獲得可表達(dá)mFHSRn的大腸桿菌菌株，為后續(xù)的相關(guān)研究奠定了基礎(chǔ)。【關(guān)鍵詞】卵泡刺激素受體;原核;表達(dá);生物信息學(xué)分析Objective:ToclonefolliclestimulatinghormonereceptorgeneNterminalfragment(2890aa)(mFSHRn),andtofo

3、recastthepossibilityofitsencodingproteinbeingpregnancyvaccine,12andtoconstructprokaryoticexpressionrecombinantplasmidandexpressitincolibacillus.Methods：MousetestisRNAwasextractedandinverselytranscribedtocDNAbymeansofRTPCR.TheprimerwasdesignedaccordingtomouseFSHRNterminalseque

4、nceofGenebank,andthengenefragmentswereamplifiedandpET32avectorwasinserted.Aftersequencing,bioinformaticswasanalyzed.ExpressionproteinwasinducedbyplasmidtransformationE.coliBL21(DE3)competencestrain.Results：Theamplificationlengthwas186bp,sequencingandexpectationwascompletelycon

5、cord.Bioinformaticsanalysisshowedtheencodingproteinhadsatisfactoryantigenicity.Therestructuringprokaryoticexpressionplasmidobtainedreconandinducedexpression.Conclusion：mFSHRnproteincanbeareliablecandidateofpregnancyvaccine.WesuccessfullyconstructpET32amFHSRnprokaryoticexpress

6、ionrecombinantplasmidandgainmFHSRnexpressingcolibacillusstrain,andlayafoundationforfurtherstudy.　　[KEYWORDS]Folliclestimulatinghormonereceptor;Protocaryon;Expression;Bioinformaticsanalysis　　卵泡刺激素(folliclestimulatinghormone12，F(xiàn)SH)是一種糖蛋白激素，通過特定的G蛋白偶聯(lián)受體在細(xì)胞膜表面發(fā)揮作用。卵泡刺激素受體(follic

7、lestimulatinghormonereceptor,FSHR)是一種寡聚糖蛋白構(gòu)成的膜受體,4個(gè)單體由二硫鍵連接，屬于G蛋白偶聯(lián)受體家族。人FSHR由695個(gè)氨基酸組成：氨基端17個(gè)氨基酸為疏水性信號(hào)肽;緊接信號(hào)肽的是349個(gè)氨基酸組成的親水性結(jié)構(gòu)區(qū)，由亮氨酸-精氨酸-精氨酸序列構(gòu)成的交替β片層和α螺旋結(jié)構(gòu)組成，構(gòu)成FSHR的胞外區(qū);接著是264個(gè)氨基酸構(gòu)成的跨膜區(qū)，由7個(gè)徘徊式穿越細(xì)胞膜的疏水段組成;胞內(nèi)區(qū)是65個(gè)氨基酸組成的羧基末端?！　《嗄陙?，免疫避孕疫苗用于控制男性生育的研究日益增多，以幾種生殖激素、激素受體和精子特異蛋白作為靶抗

8、原為主。近年來的相關(guān)研究表明選擇特異性結(jié)合靶點(diǎn)的多肽片段對(duì)疫苗的選擇和免疫功能很重要，可以提高疫苗的特異性和免疫效果，是有